本發明公開了一種采用芥菜型油菜基因ANS和埃塞俄比亞芥基因BAN共轉化提高大腸桿菌中原花色素含量的方法。本發明從芥菜型油菜種子的cDNA中克隆花色素合成酶ANS基因和埃塞俄比亞芥種子的cDNA克隆花色素還原酶BAN基因，構建含ANS和BAN基因的原核表達載體pET-ANS-BAN，將ANS和BAN基因同時導入BL21大腸桿菌菌株。轉化菌株在的LB液體培養基中，28-38℃，150-250rpm(轉/分鐘)培養6-12小時候后，再轉移到葡萄皮提取物(0.2-0.8g/L)的LB液體培養基中，28-38℃，150-250rpm震蕩培養36-54小時后，離心收集菌體，采用DMACA-HCl法測定大腸桿菌所含的原花色素的量。本發明獲得的轉基因大腸桿菌中原花色素的含量顯著提高，最高達到非轉化對照菌株的24.2倍。

1.一種采用芥菜型油菜基因ANS?和埃塞俄比亞芥BAN?共轉化提高大腸桿菌中原花色素含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）從芥菜型油菜種子的cDNA中克隆花色素合成酶ANS基因和埃塞俄比亞芥種子的?cDNA中克隆花色素還原酶BAN基因；（2）把ANS?和BAN?基因可操作性地連接于表達調控序列，形成含ANS?和BAN基因的原核表達載體;（3）將ANS和BAN基因同時導入BL21大腸桿菌，轉化的單菌落在0.5-1.0?mL的LB液體培養基中，28-38℃，150-250rpm(轉/分鐘)培養6-12小時候后，再在含黑色葡萄皮提取物的LB液體培養基中，28-38℃，150-250rpm震蕩培養36-54小時后，常溫下，10000-12000g離心10-20min收集菌體；（4）采用DMACA-HCl法測定大腸桿菌所含原花色素的量，篩選獲得原花色素含量提高的大腸桿菌菌株；所述的黑色葡萄皮提取物提取方法是：將黑色或深紅色的葡萄皮用粉碎機粉碎，過1.0?mm?的篩，將用20％-50％的甲醇(v/v)作為萃取溶劑，葡萄皮量與溶劑用量之比為1∶3-5(w/w)，萃取溫度為50℃-60℃，萃取時間為3-6h；回收甲醇后的濃縮液在10000-12000g離心10-15min，過濾去渣，然后在濃縮液中加入丙酮，濃縮液與丙酮之比為1∶1-2(v/v)，攪拌混勻5-10min，過濾除去雜質，濃縮液經回收丙酮后，在40℃-60℃下真空干燥即得葡萄皮提取物。2.根據權利要求1所述的采用芥菜型油菜基因ANS?和埃塞俄比亞芥BAN?共轉化提高大腸桿菌中原花色素含量的方法，其特征是，所述的LB液體培養基中含0.2-0.8g/L的黑色葡萄皮提取物。