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一種納塔櫟體細胞胚胎發生的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-14
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310519079.4 
  • 技術(專利)名稱 一種納塔櫟體細胞胚胎發生的方法 
  • 項目單位 江蘇省林業科學研究院
  • 發明人 張敏,黃利斌,陳智敏,方炎明,蔣澤平,蔣春 
  • 行業類別 中藥材獲取-非動植物采選
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 李四翔
  • 發布時間 2021-12-14  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種納塔櫟體細胞胚胎的發生方法,包括選材、消毒處理、試管芽苗誘導培養、體胚誘導、增殖培養、成熟培養、體胚的萌發一系列操作;在體胚誘導、增殖、成熟、萌發培養的培養基中進行培養。本發明具有繁殖系數高,繁殖時間不受季節限制,取材對母體傷害小,無病蟲害困擾,能夠保持原植株優良性狀,在納塔櫟苗木生產及科研中均具有重要的應用價值。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種納塔櫟體細胞胚胎的發生方法,其特征在于:包括以下步驟:?(1)選材:選取9年生納塔櫟優選單株的當年生萌條,將其剪成4~6cm的帶芽小段;?(2)對帶芽小段外植體進行消毒處理;?(3)芽誘導培養:在無菌條件下,將步驟(2)中的外植體用剪刀去除莖段頭尾氧化變黑部分,分清形態學上、下端,剪成長1.5~3cm的Y字型,下端切口呈斜型,豎直接種于芽誘導培養基中培養15~20d,分化長成無菌芽苗;所述芽誘導培養基的配方為:WPM基本培養基,附加0.05~0.08mg·L-16-BA、0.05~0.06mg·L-1NAA、25~40g·L-1蔗糖、6.5~7.0g·L-1卡拉膠,調pH值為5.7~5.8;?(4)體胚誘導:將步驟(3)中長成的無菌苗嫩葉接種到體胚誘導培養基中培養15~30d;MS基本培養基,附加0.16~0.20mg·L-16-BA、0.2~0.3mg·L-1NAA、0.08~0.12mg·L-12,4-D、25~40g·L-1蔗糖、6.5~7.0g·L-1卡拉膠,調pH值為5.7~5.8;?(5)體胚增殖培養:將步驟(4)中誘導產生的體胚,進行增殖培養,20~25d后,體胚迅速增殖呈白色或黃色透明顆粒狀;體胚增殖培養基配方為:MS基本培養基,附加1.8~2.0mg·L-16-BA、0.01~0.03mg·L-1NAA、25~40g·L-1蔗糖、6.5~7.0g·L-1卡拉膠,調pH值為5.7~5.8;?(6)成熟培養:將步驟(5)中增殖獲得的體胚,接種于含有成熟培養基的培養瓶中培養30~50d;體胚成熟培養基配方為:MS基本培養基,附加40~60g·L-1蔗糖、6.5~7.0g·L-1卡拉膠,調pH值為5.7~5.8;?(7)體胚的萌發:將步驟(6)中獲得的成熟體胚接種于萌發培養基中培養40~60d進行植株再生;所述體胚萌發培養基配方為:MS基本培養基,附加8~12g·L-1山梨醇、20~30g·L-1蔗糖、6.5~7.0g·L-1卡拉膠,調pH值為5.7~5.8;所述的WPM基本培養基即木本植物培養基的具體配方如下:?2.根據權利要求1所述的納塔櫟體細胞胚胎的發生方法,其特征在于:所述步驟(2)中的消毒處理過程包括:將采集的枝條去除2/3葉片后修剪成約4~6cm長的帶腋芽莖段,洗滌劑浸泡30min,流水沖洗10次,蒸餾水清洗外植體后,用無菌水沖洗3~4次,置于無菌燒杯中,在超凈工作臺內用70%的酒精浸泡30s,無菌水沖洗2~3次,再用0.1%升汞溶液消毒3min,最后用無菌水沖洗6次;所述步驟(3)、步驟(4)、步驟(5)、步驟(6)和步驟(7)中的培養條件為:光照強度為1600~2500lx,每日光照時間為16h,溫度為(25±2)℃。?3.根據權利要求1中一項所述的納塔櫟體細胞胚胎的發生方法,其特征在于:所述的MS基本培養基的具體配方如下:?
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