1.一種海倫兜蘭無菌播種快速繁殖方法,其特征在于,包括以下步驟:
a、人工授粉和種子的獲得:選擇生長健壯的海倫兜蘭(Paphiopedilum helenae
Aver.)母株進行異株人工授粉,選擇授粉后120~180天的粉末狀種子作為外植體進行無菌
播種;
b、外植體消毒和無菌播種:將授粉后120~180天的蒴果進行消毒處理,切開果實,將粉
末狀種子接種到種子萌發培養基上培養,培養溫度25℃~30℃,光照度1500~2000勒克斯,
光照時間12~16小時/天,胚萌發形成原球莖;所述的種子萌發培養基為:每升含有椰子汁
50~100毫升、萘乙酸0.1~0.5毫克、活性炭1.0~2.0克、蔗糖30克、瓊脂6~7克,其余為1/
4MS培養基,pH 5.8~6.0;
c、類原球莖的誘導和增殖:將步驟b得到的原球莖接種到類原球莖的誘導和增殖的培
養基上培養,培養溫度25℃~30℃,光照度1500~2000勒克斯,光照時間12~16小時/天,獲
得類原球莖,將類原球莖接種到新的類原球莖的誘導和增殖的培養基上進行增殖培養,培
養溫度25℃~30℃,光照度1500~2000勒克斯,光照時間12~16小時/天,類原球莖大量增
殖;所述的類原球莖的誘導和增殖的培養基為:每升含有6-芐基腺嘌呤5.0~10.0毫克、激
動素5.0~10.0毫克、萘乙酸1.0~2.0毫克、椰子汁100~200毫升、蛋白胨1~2克、蔗糖30
克、瓊脂6~7克,其余為1/2MS培養基,pH 5.8~6.0;
d、類原球莖的分化:將類原球莖接種到分化培養基上培養,培養溫度25℃~30℃,光照
度1500~2000勒克斯,光照時間12~16小時/天,類原球莖分化出小苗;所述的分化培養基
為:每升含有6-芐基腺嘌呤0.2~1.0毫克、萘乙酸1.0~2.0毫克、椰子汁100~200毫升、蛋
白胨1~2克、活性炭1.0~2.0克、蔗糖30克、瓊脂6~7克,其余為1/2MS培養基,pH 5.8~
6.0;
e、壯苗培養:將小苗接種到壯苗培養基上培養,培養溫度25℃~30℃,光照度1500~
2000勒克斯,光照時間12~16小時/天,獲得完整植株;所述的壯苗培養基為:每升含有花寶
1號1~2克、花寶2號1~2克、MS培養基的維生素和肌醇成分、萘乙酸1.0~2.0毫克、椰子汁
100~200毫升、蛋白胨1~2克、香蕉勻漿50~150克、活性炭1.0~2.0克、蔗糖30克、瓊脂6~
7克,余量為水,pH 5.8~6.0;
f、試管苗移栽:將完整植株在自然光下煉苗10~15天,然后取出植株洗凈根部的培養
基,移栽到植金石、松樹皮和泥炭土按質量比2~3:2~3:1混合的栽培基質中培養獲得海倫
兜蘭種苗。
2.根據權利要求1所述的海倫兜蘭無菌播種快速繁殖方法,其特征在于,步驟b所述的
將授粉后120~180天的蒴果進行消毒處理具體為:將蒴果用體積分數70%~80%的酒精浸
泡30~60秒后,用質量分數0.1%~0.2%的升汞溶液消毒10~20分鐘,無菌水漂洗4~5次。
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