本發明公開一種制備枯草芽孢桿菌的方法，采用液固兩相聯合發酵工藝，即在液體中培養種子液，達到適宜濃度后再接種到固體培養基上，無需過濾步驟，不易污染，制備的枯草芽孢桿菌濃度在1×10個活芽孢/克以上。本發明所述方法步驟簡單，裝置投資少，生產成本低，無三廢。本發明所述方法制備的枯草芽孢桿菌濃度高，病蟲害防治效果好，可應用于防治水稻稻瘟病、蔬菜灰霉病、白粉病、橡膠樹白粉病，具有良好的應用前景。

1.一種制備枯草芽孢桿菌的方法，包括以下步驟：
步驟1：將第一液體培養基調pH值為6.5～7.5，高溫滅菌后冷卻至室溫，
接種活化的枯草芽孢桿菌菌種，培養20～40小時，得液體菌種備用，所述第
一液體培養基為馬鈴薯蔗糖培養基或牛肉汁蛋白胨培養基；
步驟2：將第二液體培養基高溫滅菌后冷卻至室溫，按培養基體積的3％
接種步驟1所得液體菌種，攪拌并通氣，在無菌狀態培養24～35小時，得種
子液備用，所述第二液體培養基的配方為玉米粉∶大豆粉∶水的重量比為1∶
2-3∶150-200，或玉米粉∶大豆粉∶葡萄糖∶水的重量比為1∶2∶1∶200；
步驟3：將麩皮60％-70％、稻草粉20％-30％、玉米粉10％-20％混合均勻配
制成固體培養基，經高溫滅菌后，降溫至室溫，在無菌狀態接種步驟2所得
種子液并進行培養；
步驟4：將步驟3所得培養物在無菌狀態、35℃進行固體發酵培養72～
90小時，干燥后，即得到本發明所述枯草芽孢桿菌。
2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟1至3所述培養的培
養溫度為28℃～30℃。
3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟2所述通氣的通氣量為
1∶1～1.5。
4.按照權利要求1所述方法，其特征在于，步驟2中所述接種濃度為
0.6×10⁹個芽孢/毫升。
5.按照權利要求1所述方法，其特征在于，步驟3的接種量為所述培養
基重量的3％～10％。
6.按照權利要求1所述方法，其特征在于，步驟4所述干燥在0℃-50
℃進行。
7.按照權利要求1所述方法，其特征在于，步驟1-3中所述高溫滅菌為
120～130℃滅菌30-40分鐘。