公開了從益生菌菌株凝結(jié)芽孢桿菌SBC?37(以菌株號MTCC 5856保藏于微生物菌種保藏與基因庫(Microbial Type Culture Collection and Gene Bank))中產(chǎn)生部分純化的細胞外代謝物制劑的方法，所述菌株表現(xiàn)出與已知細菌菌株凝結(jié)芽孢桿菌ATCC 31284、凝結(jié)芽孢桿菌NBRC 3887和凝結(jié)芽孢桿菌ATCC 7050具有99％遺傳同源性。還公開了所述細胞外代謝物制劑針對一組微生物病原的抗菌譜，包括當(dāng)與協(xié)同防腐劑共混物組合時的制劑的協(xié)同抗菌作用，所述協(xié)同防腐劑共混物包括約61％w/w的百里酚，約38％的甘油一月桂酸酯和獲自木蘭的超臨界流浸膏的約1％w/w的木蘭醇。單獨的細胞外代謝物制劑或所述細胞外代謝物制劑和防腐劑共混物的組合也以協(xié)同的方式抑制了微生物生物膜形成。

1.用于從益生菌菌株凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus coagulans)MTCC 5856中產(chǎn)生部分純化
的細胞外代謝物制劑的純化方法，所述菌株表現(xiàn)出與已知細菌菌株凝結(jié)芽孢桿菌ATCC
31284、凝結(jié)芽孢桿菌NBRC 3887和凝結(jié)芽孢桿菌ATCC 7050具有99％遺傳同源性，所述純化
方法包括以下步驟：
a.將表現(xiàn)出與已知細菌菌株凝結(jié)芽孢桿菌ATCC 31284、凝結(jié)芽孢桿菌NBRC 3887和凝
結(jié)芽孢桿菌ATCC 7050具有99％遺傳同源性的凝結(jié)芽孢桿菌MTCC 5856接種到1.0升的葡萄
糖酵母提取物醋酸鹽肉湯培養(yǎng)基或含0.5％tween 80的MRS肉湯培養(yǎng)基或玉米漿干粉培養(yǎng)
基中；
b.在37℃，120rpm下在步驟a的接種過的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵24-48h；
c.在4000-7000rpm下離心步驟b的發(fā)酵肉湯；
d.在50℃下通過利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮步驟c的上清液10倍；
e.向步驟d的100ml的10倍濃縮上清液中逐滴加入150ml冰冷的丙酮，然后混合；
f.將步驟e的混合物在0℃孵育30分鐘，然后在7000-8000rpm下離心；
g.棄去步驟f中獲得的沉淀物并收集60％丙酮飽和的上清液200ml；
h.通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮步驟g中的丙酮飽和的上清液至50ml；
i.利用4N HCl調(diào)節(jié)pH至5.0，過濾并在進一步使用之前貯存在-20℃，其中所述過濾步
驟使用0.22微米的由印度生產(chǎn)的Millex Millipore；
j.冷凍干燥/噴霧干燥/托盤干燥步驟h的上清液；
其中所述凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus coagulans)MTCC 5856保藏于微生物菌種保藏與基
因庫(Microbial Type Culture Collection and Gene Bank)，并分配菌株號MTCC 5856。
2.一種微生物控制的方法，所述方法包括步驟：將有效濃度的根據(jù)權(quán)利要求1所述方法
制備的部分純化的細胞外代謝物制劑與靶微生物細胞相接觸。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述微生物細胞是選自包含以下的組中之一：銅綠假單
胞菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，變形鏈球菌，痤瘡丙酸桿菌，蠟狀芽孢桿
菌和阿博尼沙門氏菌。
4.一種微生物控制的方法，所述方法包括步驟：將微生物細胞與有效濃度的基本上由
權(quán)利要求1所述方法制備的部分純化的細胞外代謝物組成的制劑和防腐劑共混物相接觸，
所述防腐劑共混物包括61％w/w的百里酚，38％w/w的甘油一月桂酸酯和獲自木蘭
(Magnolia officinalis)的超臨界流浸膏的1％w/w的木蘭醇。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述微生物細胞是選自包含以下的組中之一：銅綠假單
胞菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，變形鏈球菌，痤瘡丙酸桿菌，蠟狀芽孢桿
菌和阿博尼沙門氏菌。
6.一種抑制微生物生物膜形成的方法，所述方法包括步驟：將產(chǎn)生物膜的微生物細胞
與基本上由權(quán)利要求1所述方法所制備的的部分純化的細胞外代謝物組成的制劑單獨地相
接觸，或與防腐劑共混物組合的所述制劑相接觸，所述防腐劑共混物包括61％w/w的百里
酚，38％w/w的甘油一月桂酸酯和獲自木蘭的超臨界流浸膏的1％w/w的木蘭醇。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述產(chǎn)生物膜的微生物細胞是選自包含以下的組中之
一：銅綠假單胞菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，變形鏈球菌。
8.一種在蔗糖存在下防止pH下降并進一步防止變形鏈球菌的生物膜聚集的方法，所述
方法包括步驟：將產(chǎn)生物膜/斑變形鏈球菌與基本上由權(quán)利要求1所述方法所制備的部分純
化的細胞外代謝物組成的制劑單獨相接觸，或與防腐劑共混物組合的所述制劑相接觸，所
述防腐劑共混物包括61％w/w的百里酚，38％w/w的甘油一月桂酸酯和獲自木蘭的超臨界流
浸膏的1％w/w的木蘭醇。