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一種寡核苷酸探針以及用其對靶分子進行檢測的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-28
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210193307.9 
  • 技術(專利)名稱 一種寡核苷酸探針以及用其對靶分子進行檢測的方法 
  • 項目單位 中國科學院成都生物研究所
  • 發明人 唐卓,董娟 
  • 行業類別 醫療器械-診斷設備
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 馮海敏
  • 發布時間 2021-12-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供一種集信號放大和信號報告為一體的寡核苷酸探針。探針是一對基于靶分子設計的具有粘性末端的DNA發夾序列,實質是雜交鏈式反應燃料分子和G-四鏈體序列相結合的產物,既具有雜交鏈式反應可通過無酶、等溫的方式將靶分子信號級聯放大的特點,又可通過G-四鏈體序列這一信號報告元件的引入使得放大后的靶分子信號以方便、簡捷的方式得以檢測。本發明還提供了由上述探針介導的無酶等溫核酸探針方法,可使待檢測物的信號在沒有任何酶參與且于常溫條件下便可得到放大和檢測,方法靈敏準確、簡便易行。
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  • 02

    說明書

    1.一種集信號放大和信號報告為一體的寡核苷酸探針,其特征在于,所
    述探針為一對基于靶分子設計的具有粘性末端的DNA發夾序列,其由
    一條普通的單鏈寡核苷酸序列通過內部堿基互補結合形成的,均由粘
    性末端、莖部和環部組成;第一個發夾序列的粘性末端位于5’-端,
    第二個發夾序列的粘性末端位于3’-端;
    其中,第一個發夾序列的莖部序列由兩部分組成,即①靠近粘性末
    端一側的部分莖部序列,該序列與粘性末端共同構成靶分子的特異識別
    序列;和②靠近環部的部分莖部序列,其為G-四鏈體5’-端部分序列;
    第一個發夾序列的環部序列與被封閉的G-四鏈體序列3’-端一側相
    接,其主要由G-四鏈體序列的剩余部分組成;
    第二個發夾序列的粘性末端位于整個發夾序列的3’-端,與相鄰的莖
    部序列共同組成第一個發夾序列環部3’-端一側莖部序列的互補序列;
    第二個發夾序列的環部為第一個發夾序列5’-粘性末端的互補序列,
    與相鄰的5’-端一側的莖部序列共同組成第一個發夾序列中靶分子特異
    識別序列的互補序列。
    2.如權利要求1所述的寡核苷酸探針,其特征在于,所述的G-四鏈體5’-
    端部分序列為被封閉在莖部的一小段G-四鏈體序列,使G-四鏈體序
    列在無靶分子存在時不顯示活性。
    3.如權利要求1或2所述的寡核苷酸探針,其特征在于,第一個發夾序
    列的靶分子特異識別序列與被封閉的信號報告元件序列結合處附近
    含有至少一個堿基與莖部另一側序列的相應堿基不配對。
    4.如權利要求1或2所述的寡核苷酸探針,其特征在于,所引入的G-
    四鏈體序列為:5’-TGG?GTA?GGG?CGG?GTT?GGG?AAA-3’。
    5.一種用無酶、等溫核酸探針技術對靶分子進行檢測的方法,其特征在
    于,在反應體系中加入如權利要求1所述的寡核苷酸探針,在pH為
    中性或近中性、Na+濃度至少大于200mM和常溫條件下,靶分子打開
    探針,引發雜交鏈式反應,一段時間后形成類似雙鏈DNA的長鏈聚合
    分子,達到將靶分子信號級聯放大的目的,結果可通過瓊脂糖凝膠電
    泳進行檢測;與此同時,探針中的G-四鏈體序列得到釋放,使得放大
    后的靶分子信號可通過多種信號呈現形式得到檢測。
    6.如權利要求5所述的方法,其特征在于,檢測結果可通過肉眼觀察、
    可見光吸收或熒光吸收測定這些信號檢測方式來反映。
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專利技術附圖

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