1.一種集信號放大和信號報告為一體的寡核苷酸探針,其特征在于,所
述探針為一對基于靶分子設計的具有粘性末端的DNA發夾序列,其由
一條普通的單鏈寡核苷酸序列通過內部堿基互補結合形成的,均由粘
性末端、莖部和環部組成;第一個發夾序列的粘性末端位于5’-端,
第二個發夾序列的粘性末端位于3’-端;
其中,第一個發夾序列的莖部序列由兩部分組成,即①靠近粘性末
端一側的部分莖部序列,該序列與粘性末端共同構成靶分子的特異識別
序列;和②靠近環部的部分莖部序列,其為G-四鏈體5’-端部分序列;
第一個發夾序列的環部序列與被封閉的G-四鏈體序列3’-端一側相
接,其主要由G-四鏈體序列的剩余部分組成;
第二個發夾序列的粘性末端位于整個發夾序列的3’-端,與相鄰的莖
部序列共同組成第一個發夾序列環部3’-端一側莖部序列的互補序列;
第二個發夾序列的環部為第一個發夾序列5’-粘性末端的互補序列,
與相鄰的5’-端一側的莖部序列共同組成第一個發夾序列中靶分子特異
識別序列的互補序列。
2.如權利要求1所述的寡核苷酸探針,其特征在于,所述的G-四鏈體5’-
端部分序列為被封閉在莖部的一小段G-四鏈體序列,使G-四鏈體序
列在無靶分子存在時不顯示活性。
3.如權利要求1或2所述的寡核苷酸探針,其特征在于,第一個發夾序
列的靶分子特異識別序列與被封閉的信號報告元件序列結合處附近
含有至少一個堿基與莖部另一側序列的相應堿基不配對。
4.如權利要求1或2所述的寡核苷酸探針,其特征在于,所引入的G-
四鏈體序列為:5’-TGG?GTA?GGG?CGG?GTT?GGG?AAA-3’。
5.一種用無酶、等溫核酸探針技術對靶分子進行檢測的方法,其特征在
于,在反應體系中加入如權利要求1所述的寡核苷酸探針,在pH為
中性或近中性、Na+濃度至少大于200mM和常溫條件下,靶分子打開
探針,引發雜交鏈式反應,一段時間后形成類似雙鏈DNA的長鏈聚合
分子,達到將靶分子信號級聯放大的目的,結果可通過瓊脂糖凝膠電
泳進行檢測;與此同時,探針中的G-四鏈體序列得到釋放,使得放大
后的靶分子信號可通過多種信號呈現形式得到檢測。
6.如權利要求5所述的方法,其特征在于,檢測結果可通過肉眼觀察、
可見光吸收或熒光吸收測定這些信號檢測方式來反映。
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