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肽核酸原位熒光雜交技術檢測沙門氏菌的方法及PNA探針

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-13
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210079061.2 
  • 技術(專利)名稱 肽核酸原位熒光雜交技術檢測沙門氏菌的方法及PNA探針 
  • 項目單位 浙江省檢驗檢疫科學技術研究院
  • 發明人 李可,張曉峰,吳珊,帥江冰,何永強 
  • 行業類別 醫療器械-診斷設備
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 周思暢
  • 發布時間 2021-12-13  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及PNA-FISH法鑒定沙門氏菌屬的方法,尤其涉及用于鑒定主要食源致病性沙門氏菌()的方法和PNA探針。肽核酸原位熒光雜交技術檢測沙門氏菌用PNA探針Sal-invA-1,所述的PNA探針的序列為TCTGGATGGTATGCC。本發明的PNA具有與DNA和RNA特異性結合的高穩定性、雜交快速性、及其良好的細胞穿透性,使本發明的檢測方法具有快速,準確、靈敏的特性。同時結合原位熒光雜交技術使檢測具有分子生物學和形態學的雙重保證,更加提高了鑒定的準確率。
    展開
  • 02

    說明書

    1.肽核酸原位熒光雜交技術檢測沙門氏菌(Salmonella)用PNA探針,其特征在于:PNA探針的序列為TCTGGATGGTATGCC。2.肽核酸原位熒光雜交技術檢測沙門氏菌的方法,其特征在于該方法包括以下的步驟:1)離心收集對數生長期的細菌,PBS調整細菌濃度至OD600=0.5-2.0,取10μl?菌液于98%酒精清洗過的玻片上涂勻,火焰固定,將玻片于80%的酒精中浸泡15分鐘,風干;2)將25μl含500pmole/mlPNA的雜交緩沖液滴加于玻片上,所述的PNA探針的序列為TCTGGATGGTATGCC,55℃作用1.5小時,雜交后玻片于55℃預熱的洗滌緩沖液中洗滌2次,每次10分鐘,取2~5μl菌液涂片,風干后熒光顯微鏡觀察熒光亮度及細菌的形態;上述的方法不適用于疾病的診斷與治療。3.根據權利要求2所述的肽核酸原位熒光雜交技術檢測沙門氏菌的方法,其特征在于雜交緩沖液pH7.5,包括:10%(w/v)?硫酸葡聚糖,10?mM?NaCl,30%?(v/v)甲酰胺,0.1%(w/v)焦磷酸鈉,0.2%(w/v)聚乙烯吡咯烷酮,0.2%(w/v)聚蔗糖,5?mM?Na2EDTA,0.2%?(v/v)?TritonX-100,50?mM?Tris-HCl。4.根據權利要求2所述的肽核酸原位熒光雜交技術檢測沙門氏菌的方法,其特征在于洗滌緩沖液pH10,包括:15?mM?Tris,15mM?NaCl和0.1%?(v/v)?TritonX-100。
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