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雞傳染性支氣管炎病毒HA抗原的制備方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-17
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200710193087.9 
  • 技術(專利)名稱 雞傳染性支氣管炎病毒HA抗原的制備方法 
  • 項目單位 河南農業大學
  • 發明人 崔保安,李新生,高文明,王莉,王學斌,楊明凡,陳少渠,馮利霞 
  • 行業類別 醫藥制造-生物藥品
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 孫婕
  • 發布時間 2022-01-17  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種雞傳染性支氣管炎病毒HA抗原的制備方法,該方法是通過病毒增殖、病毒液濃縮與磷脂酶C處理、抗原的滅活和抗原的穩定步驟制得雞傳染性支氣管炎病毒HA抗原。所得HA抗原在4℃的穩定性由原來的24小時延長到6個月以上,另外抗原效價穩定,避免了每次試驗時臨時制備抗原、且使用前需要檢測這一長期未解決的難題,減少了HI試驗的工作量。制備的IBV HA抗原可成功應用于雞群IBV疫苗免疫后血清HI抗體效價檢測,解決了長期以來我國檢測IBV疫苗免疫效果靠中和試驗,既費時費力,又有散毒危險的難題。
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  • 02

    說明書

    1.一種雞傳染性支氣管炎病毒血球凝集(HA)抗原的制備方法,其特征在于:該方法是按下述步驟進行的:(1)病毒增殖將病毒株用無菌生理鹽水按體積比1∶100倍稀釋后,經尿囊腔接種10日齡SPF雞胚,每胚0.1mL,置37℃繼續孵育,棄去24h前死胚,36h后取出所有胚放入4℃冰箱過夜,收集尿囊液,4℃保存備用;(2)病毒液濃縮與磷脂酶C處理將收集的新鮮尿囊液以3000~5000rpm高速冷凍離心40~50min,取上清液以18000~25000rpm高速冷凍離心55~65min后,棄去上清液,沉淀用HA緩沖液充分懸浮,HA緩沖液的添加量是第一次離心后所取上清液體積的1/200~1/100;然后向懸浮液中加入磷脂酶C,最終含量為1IU/mL,充分混合置37℃水浴作用2~3h,每隔20min震蕩一次,作用完畢后取出病毒液置4℃保存備用;所述的HA緩沖液為0.1M?PH6.0~9.0的PBS緩沖液;(3)抗原的滅活按病毒液體積的0.05%加入滅活劑,置4℃滅活24h后;(4)抗原的穩定按病毒液與穩定劑體積比3~10∶1的比例加入穩定劑,震蕩混勻后利用冷凍干燥技術凍干后即得到雞傳染性支氣管炎病毒HA抗原。2.根據權利要求1所述的雞傳染性支氣管炎病毒血球凝集(HA)抗原的制備方法,其特征在于:所述的病毒株為雞腎型傳染性支氣管炎病毒(Tarpeia?nephrite?pulli)HN99株CGMCCNo.1729,或雞呼吸型傳染性支氣管炎M41?病毒。3.根據權利要求1或2所述的雞傳染性支氣管炎病毒血球凝集(HA)抗原的制備方法,其特征在于:所述的滅活劑為β-丙內酯。4.根據權利要求1或2所述的雞傳染性支氣管炎病毒血球凝集(HA)抗原的制備方法,其特征在于:所述的穩定劑為明膠、蔗糖、聚乙二醇、甘露寡糖和殼聚糖中的一種。5.根據權利要求4所述的雞傳染性支氣管炎病毒血球凝集(HA)抗原的制備方法,其特征在于:所述的穩定劑為明膠。6.根據權利要求1或2所述的雞傳染性支氣管炎病毒血球凝集(HA)抗原的制備方法,其特征在于:所述的冷凍干燥技術為真空冷凍干燥技術。?
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