1.一種諾如病毒病毒樣顆粒的制備方法，包括如下步驟：
(1)酶切擴增諾如病毒主衣殼蛋白編碼序列片段和質粒載體，連接酶連接并轉化感受
態大腸埃希菌DH5α；
(2)擴增表達轉化成功的大腸桿菌宿主菌株；
(3)純化擴增表達的宿主菌株中的諾如病毒主衣殼蛋白顆粒；
步驟(1)中所述的擴增時使用的引物序列為：
NoVFL-F GGAATTCCATATGNNNNNNNNNNNNATGAAGATGGCGTCGAGTGACGCCAAC，
NoV-R CGGGATCCTTATAGTGCACGTCTACGCCCCGT；
步驟(1)所述的酶切連接及轉化方法為：用NdeI和BamHI同時酶切擴增片段目的序列和
pCold載體，回收目的片段和載體片段，以T4DNA連接酶室溫連接10-30分鐘，連接產物轉化
感受態大腸埃希菌DH5α，隨機挑選單克隆，接種于LB培養基中，菌落PCR鑒定正確的菌株加
入終濃度為30％滅菌甘油保存于-80℃；所述的諾如病毒病毒樣顆粒的蛋白為VP1-M，其氨
基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通過前述擴增引物導入到N端的五肽的氨基酸序列為MGSSG。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的擴增表達方法為：取適量凍
存菌液接種于LB培養基中，37℃振蕩培養，待菌液A600＝0.4-0.8時，轉移至15℃放置30分
鐘，然后加入IPTG至終濃度為0.1-0.5mM/L，15℃誘導24-72小時。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述的純化方法為下述方法一或
方法二，
方法一：
將細菌裂解液上清于4℃條件下，12000x g離心30分鐘，收集上清；
根據上清體積加入適量飽和硫酸銨使成33％飽和度硫酸銨溶液，4℃攪拌下沉淀過夜；
4℃條件下，12000x g離心20分鐘，棄上清；
沉淀用無菌PBS溶液重懸過夜，重懸液低速離心去除不溶物質，上清經凝膠層析收集目
的蛋白，加入飽和硫酸銨溶液使成33％飽和度硫酸銨溶液，4℃攪拌下沉淀過夜；
4℃條件下，12000x g離心20分鐘，棄上清；
沉淀用無菌PBS重懸過夜，重懸液低速離心去除不溶物質；
方法二：
細菌裂解液上清直接采用25％蔗糖墊底，28000rpm，4℃下離心3小時沉淀蛋白；
沉淀蛋白采用無菌PBS復溶，復溶后蛋白采取離心去除不溶蛋白，離心參數為10000x
g，30分鐘，上清和等體積1.6g/ml氯化銫水溶液混合，41000rpm，10℃下離心18-24小時，抽
取目的蛋白條帶。
4.權利要求1-3任一所述的諾如病毒病毒樣顆粒的制備方法在制備諾如病毒抗原或疫
苗中的應用。
5.權利要求1-3任一所述的諾如病毒病毒樣顆粒的制備方法在制備重組諾如病毒或諾
如病毒病毒樣顆粒中的應用。
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