本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)苯乙醇的大腸桿菌工程菌株及其應(yīng)用，以能夠大量積累苯丙氨酸（L-Phe）的大腸桿菌基因工程菌作為出發(fā)菌株（搖瓶發(fā)酵苯丙氨酸發(fā)酵水平能達(dá)到6.0g/L），將苯丙酮酸脫羧酶（KDC）以及乙醇脫氫酶（ADH1），通過單獨(dú)表達(dá)以及通過合適的基因組合串聯(lián)表達(dá)兩個(gè)關(guān)鍵酶基因，構(gòu)建重組菌株，串聯(lián)表達(dá)苯丙酮酸脫羧酶以及乙醇脫氫酶的重組菌株能夠產(chǎn)生β-苯乙醇130mg/L，苯丙氨酸產(chǎn)量為5.0g/L，而出發(fā)菌株高產(chǎn)L-Phe的大腸桿菌作為對照菌株在整個(gè)發(fā)酵過程中檢測不到苯乙醇的積累。本發(fā)明提供了一種利用能過量表達(dá)來源于不同宿主的合成代謝途徑中的酶基因，通過代謝工程的手段使得大腸桿菌利用葡萄糖為唯一碳源發(fā)酵直接生產(chǎn)苯乙醇的方法。

1.一種高產(chǎn)苯乙醇的大腸桿菌工程菌株，其特征在于表達(dá)畢赤酵母（Pichia?pastoris）GS115
苯丙酮酸脫羧酶以及釀酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）乙醇脫氫酶，以大腸桿菌CCTCC?
NO：M2010009為出發(fā)菌株。
2.權(quán)利要求1所述的工程菌株，其特征在于所述表達(dá)為串聯(lián)表達(dá)。
3.權(quán)利要求1所述工程菌株的構(gòu)建方法，其特征在于以高產(chǎn)苯丙氨酸的大腸桿菌為出發(fā)
菌株，利用表達(dá)載體pCL1920表達(dá)來源于畢赤酵母以及釀酒酵母中苯乙醇合成途徑的兩個(gè)酶
KDC、ADH1，獲得高產(chǎn)苯乙醇的大腸桿菌工程菌株。
4.權(quán)利要求1所述工程菌株發(fā)酵法生產(chǎn)苯乙醇的方法，其特征在于工程菌株活化后，按
體積百分比10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度33℃，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，當(dāng)菌體生
長至OD₆₁₀為1.5-2.0時(shí)，迅速轉(zhuǎn)至38℃搖床，繼續(xù)培養(yǎng)至48h。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖35g/L，(NH₄)₂SO₄?5
g/L，KH₂PO₄?3g/L，MgSO₄·7H₂O?3g/L，NaCl?1g/L，Na-Citrate1.5g/L，CaCl₂·2H₂O?0.015g/L，
FeSO₄·7H₂O?0.1125g/L，Thiamine-HCl?0.075g/L，L-Tyr0.4g/L，蛋白胨4g/L，酵母粉2g/L，
Kan0.04g/L，微量元素營養(yǎng)液1.5mL/L，pH6.8±0.1；12g/L?CaCO₃用于調(diào)節(jié)pH；裝液量為
50mL/250mL；
所述微量元素營養(yǎng)液為：Al₂(SO₄)₃·18H₂O?2.0g/L，CoSO₄·7H₂O?0.75g/L，CuSO₄·5H₂O?2.5
g/L，H₃BO₃?0.5g/L，MnSO₄·7H₂O?24g/L，Na₂MoO₄·2H₂O?3.0g/L，NiSO₄·6H₂O?2.5g/L，
ZnSO₄·7H₂O?15g/L。