本發明公開了一種產角蛋白酶大腸桿菌基因工程菌及其應用，屬于基因工程技術領域。本發明采用重組DNA技術將地衣芽胞桿菌Bacillus licheniformis BBE11-1的角蛋白酶（ker）基因克隆連接到大腸桿菌表達載體pET 22b(+)，并轉化Escherichia coli BL21(DE3)，經篩選鑒定得到一株可以產較高角蛋白酶的重組枯草芽孢桿菌Escherichia coliBL21(DE3)-pET22b(+)-ker，保藏編號為CCTCC NO：M 2012180。該菌株表達的角蛋白酶酶活為256U/mL，這為角蛋白酶的大規模生產奠定了良好的基礎。

1.一種利用基因工程菌發酵生產角蛋白酶的方法，其特征在于以產角蛋白酶基因工程菌為生
產菌株，斜面活化制備種子，在種子OD₆₀₀在2.5時以3%的接種量轉入基本發酵培養基，于20
℃、200rpm條件下培養；當OD值再為2.5時，降低發酵溫度到20℃誘導30小時，IPTG濃度為
0.05mM；所述種子和斜面培養基為LB培養基；所述產角蛋白酶基因工程菌，于2012年5月
24日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M2012180；所述基本發酵培
養基成分為：去離子水900mL，胰蛋白胨12g，酵母抽提物24g，甘油10mL，高壓滅菌，冷
卻至60℃，加100mL滅菌磷酸鉀緩沖液。