本發明提供一種重組大腸桿菌及用其制備溶血性磷脂酶C的方法。用目的基因來源于銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）的重組大腸桿菌BL21（DE3）/pET-plcH，CCTCC No.M 2012425作為發酵菌株進行液體發酵來制備溶血性磷脂酶C，其制備方法包括種子培養、液體發酵培養以及粗酶液的提取。利用本發明菌株通過液體發酵來生產溶血性磷脂酶C，產酶量和酶活性高，安全性好，制酶工藝簡單，成本低，易于工藝放大，在油脂精煉、磷脂改性、醫療等領域具有一定的應用前景。

1.一種使用保藏編號為CCTCC No.M 2012425的重組大腸桿菌BL21（DE3）/pET-plcH制備溶血性磷脂酶C的方法，其特征在于以該重組大腸桿菌為發酵菌株進行液體發酵，制備溶血性磷脂酶C，具體步驟如下：（1）種子培養：取50μL保藏編號為CCTCC No.M 2012425的重組大腸桿菌BL21（DE3）/pET-plcH接種于種子培養基中，在回旋式搖床上于32℃振蕩培養10h，搖床轉速150r/min；所述種子培養基成分按克/升計為：蛋白胨9g，酵母粉4g，NaCl 9g，其余成分為水，于1×10⁵ Pa高壓下滅菌20min；（2）液體發酵培養：將經過步驟（1）培養所得活化種子液按體積百分比10%的接種量接種至發酵培養基，發酵培養基裝于250ml三角瓶，裝液量為50ml，在回旋式搖床上于34℃振蕩培養4h，搖床轉速150r/min；添加乳糖至終濃度為5 g/L，在回旋式搖床上于25℃振蕩誘導培養18h，搖床轉速為150r/min；再添加甘氨酸至終濃度為3 g/L，于相同條件下繼續振蕩誘導培養28h；發酵完畢，得到發酵液；所述發酵培養基成分按克/升計為：蛋白胨9g，酵母粉5g，甘油5g，其余成分為pH7.2的0.25 mol/L Tris-HCl，于1×10⁵ Pa高壓下滅菌20min；（3）粗酶液的提?。簩⒉襟E（2）所得發酵液離心；收集上清液，即為胞外粗酶液；收集菌體細胞沉淀并超聲破碎，將所得超聲破碎液離心，取上清，即為胞內粗酶液。