本發明公開了堿基組成如SEQ ID NO 7所示的突變型TNF?α基因和抗原TNF?α基因表達的方法，包括以下步驟：以人分泌型TNF?α基因cDNA克隆為模板，以引物SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2進行擴增，得到擴增產物T1；以引物SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4進行擴增，得到擴增產物T2；以擴增產物T1和T2為模板，以SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 4為引物，進行重疊PCR擴增，得到突變型TNF?α基因；雙酶切突變型TNF?α基因后，插入pET28a表達載體中，然后轉化大腸桿菌；誘導培養，得到TNF?α蛋白。本發明將TNF?α基因中兩對相距較近的大腸桿菌稀有密碼子突變為大腸桿菌偏愛密碼子，密碼子優化后的TNF?α基因表達量提高了至少1.5倍。

1.一種抗原TNF-α基因表達的方法，其特征是，包括以下步驟：
NCOI和HindIII雙酶切堿基組成如SEQ ID NO.7所示的突變型TNF-α基因后，插入同樣
雙酶切的pET28a表達載體中，然后轉化大腸桿菌；誘導培養，得到TNF-α蛋白。
2.根據權利要求1所述的抗原TNF-α基因表達的方法，其特征是，所述突變型TNF-α基因
通過以下步驟制備得到：
(1)以人分泌型TNF-α基因cDNA克隆為模板，以引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2進行擴
增，得到擴增產物T1；
(2)以人分泌型TNF-α基因cDNA克隆為模板，以引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4進行擴
增，得到擴增產物T2；
(3)以擴增產物T1和T2為模板，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4為引物，進行重疊PCR擴
增，得到所述突變型TNF-α基因。
3.根據權利要求1或2所述的抗原TNF-α基因表達的方法，其特征是，所述大腸桿菌是大
腸桿菌BL21。
4.根據權利要求2所述的抗原TNF-α基因表達的方法，其特征是，所述重疊PCR擴增的反
應體系為：
PrimerSTAR 2.5U/μL，Polymerase：0.5±0.05μL；
100ng/μL，擴增產物T1：3±0.5μL；
100ng/μL，擴增T2：3±0.5μL；
2.5mM dNTP：4±0.5μL；
5x PrimerSTAR Buffer：10±0.5μL
10uM，SEQ ID NO 1：1±0.05μL
10uM，SEQ ID NO 4：1±0.05μL
加H₂O至總量為50μL。
5.根據權利要求4所述的抗原TNF-α基因表達的方法，其特征是，
所述重疊PCR擴增的反應程序為：
94℃，3min；
94℃：30s；
55℃：1min；
72℃：40s；
72℃：10min；
循環數35±2。
6.堿基組成如SEQ ID NO.7所示的突變型TNF-α基因。
7.一種突變型TNF-α基因的制備方法，其特征是，包括以下步驟：
(1)以人分泌型TNF-α基因cDNA克隆為模板，以引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2進行擴
增，得到擴增產物T1；
(2)以人分泌型TNF-α基因cDNA克隆為模板，以引物SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4進行擴
增，得到擴增產物T2；
(3)以擴增產物T1和T2為模板，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4為引物，進行重疊PCR擴
增，得到堿基組成如SEQ ID NO.7所示的突變型TNF-α基因。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征是，所述重疊PCR擴增的反應體系為：
PrimerSTAR 2.5U/μL，Polymerase：0.5±0.05μL；
100ng/μL，擴增產物T1：3±0.5μL；
100ng/μL，擴增T2：3±0.5μL；
2.5mM dNTP：4±0.5μL；
5x PrimerSTAR Buffer：10±0.5μL
10uM，SEQ ID NO 1：1±0.05μL
10uM，SEQ ID NO 4：1±0.05μL
加H₂O至總量為50μL。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征是，所述重疊PCR擴增的反應程序為：
94℃，3min；
94℃：30s；
55℃：1min；
72℃：40s；
72℃：10min；
循環數35±2。