本發(fā)明屬于微生物學(xué)檢測方面的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種乳粉中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品及其制備方法。乳粉中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的目標(biāo)菌群由蠟樣芽胞桿菌、大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、金黃色葡萄球菌組成。本發(fā)明均勻性、穩(wěn)定性符合標(biāo)準(zhǔn)樣品的要求，可以最大程度保證測試樣品的穩(wěn)定性，即使在運(yùn)輸及儲(chǔ)存中大腸埃希氏菌的含量發(fā)生變化，在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上也不會(huì)影響菌落總數(shù)；樣品的制備方法，工藝簡單，成功率高。

1.乳粉中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品，其特征是：目標(biāo)菌群由蠟樣芽胞桿菌、大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、金黃色葡萄球菌組成；所述樣品以海藻糖、脫脂奶粉和無菌水為基質(zhì)，其中海藻糖的體積分?jǐn)?shù)為 12％、脫脂奶粉的體積分?jǐn)?shù)為 15%；所述樣品中目標(biāo)菌群的目標(biāo)濃度為 10⁴～10⁵ CFU/mL；所述的乳粉中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，具體過程為：（1）菌株復(fù)蘇傳代將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種到營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在36±1℃下使其復(fù)蘇和生長，并對復(fù)蘇的菌株進(jìn)行鑒定；（2）增菌目標(biāo)菌群培養(yǎng)至對數(shù)生長期末，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護(hù)劑中制成相應(yīng)單一菌種的菌液；（3）菌懸液配制將上一過程得到的菌液與凍干保護(hù)劑混合，按目標(biāo)菌群的目標(biāo)濃度10⁴～10⁵ CFU/mL配制菌懸液，按1:1體積比混合形成菌懸液，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到樣品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實(shí)；（4）凍干和包裝將裝有混合菌懸液的樣品瓶開蓋放入凍干機(jī)中，冷凍干燥50～55h，當(dāng)樣品冷凍干燥結(jié)束后，直接進(jìn)行箱內(nèi)加塞，關(guān)閉機(jī)器，樣品瓶中樣品為真空狀態(tài)；冷凍干燥機(jī)參數(shù)按如下設(shè)置：冷凍速度0.5℃/min早期冷凍點(diǎn)-1℃ 15min冷凍溫度-40℃共 熔 點(diǎn)-29℃加熱溫度20℃ 120min啟動(dòng)冷凍干燥機(jī)，機(jī)器直接進(jìn)入程序化的冷凍干燥過程，整個(gè)凍干過程 50h；（5）儲(chǔ)存將樣品放置在-18℃條件下避光保存，從全部樣品中隨機(jī)挑選樣品發(fā)放給實(shí)驗(yàn)室或進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳粉中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征是：具體過程為：（1）菌株復(fù)蘇傳代將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種到營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在36±1℃下使其復(fù)蘇和生長，并對復(fù)蘇的菌株進(jìn)行鑒定；（2）增菌目標(biāo)菌群培養(yǎng)至對數(shù)生長期末，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護(hù)劑中制成相應(yīng)單一菌種的菌液；（3）菌懸液配制將上一過程得到的菌液與凍干保護(hù)劑混合，按目標(biāo)菌群的目標(biāo)濃度10⁴～10⁵ CFU/mL配制菌懸液，按1:1體積比混合形成菌懸液，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到樣品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實(shí)；（4）凍干和包裝將裝有混合菌懸液的樣品瓶開蓋放入凍干機(jī)中，冷凍干燥50～55h，當(dāng)樣品冷凍干燥結(jié)束后，直接進(jìn)行箱內(nèi)加塞，關(guān)閉機(jī)器，樣品瓶中樣品為真空狀態(tài)；冷凍干燥機(jī)參數(shù)按如下設(shè)置：冷凍速度0.5℃/min早期冷凍點(diǎn)-1℃ 15min冷凍溫度-40℃共 熔 點(diǎn)-29℃加熱溫度20℃ 120min啟動(dòng)冷凍干燥機(jī)，機(jī)器直接進(jìn)入程序化的冷凍干燥過程，整個(gè)凍干過程 50h；（5）儲(chǔ)存將樣品放置在-18℃條件下避光保存，從全部樣品中隨機(jī)挑選樣品發(fā)放給實(shí)驗(yàn)室或進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的乳粉中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征是：所述凍干保護(hù)劑為含有海藻糖和脫脂奶粉的無菌水，其中體積分?jǐn)?shù)分別為：海藻糖12%、脫脂奶粉15%。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的乳粉中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征是：所述樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)按照GB/T 15000.3-2008《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則（3） 標(biāo)準(zhǔn)樣品 定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》進(jìn)行。