本發明公開了一種多片段DNA的酵母快速組裝方法，包括以下步驟：（1）將多個含有同源臂的DNA分子與線性化的酵母穿梭載體共轉化酵母；（2）將整個篩選培養板上的全部轉化后的酵母菌落洗脫下來，離心，棄上清，得到轉化后的酵母菌細胞；（3）提取步驟（2）獲得的酵母菌細胞的質粒DNA，轉化大腸桿菌感受態細胞；（4）篩選大腸桿菌克隆，得到大片段DNA。本發明的方法組裝大片段DNA分子的速度快、簡便可行、成功率高、成本低，效率高、易操作，可將多個小片段DNA分子組裝成一個大片段DNA分子，有利于進行工業化規模擴大，用途廣泛。

1.一種多片段DNA的酵母快速組裝方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)將多個含有同源臂的DNA分子與線性化的酵母穿梭載體pRS416或pRS413共轉化酵
母；
(2)將整個篩選培養板上的全部轉化后的酵母菌落洗脫下來，離心，棄上清，得到轉化
后的酵母菌細胞；
(3)提取步驟(2)獲得的酵母菌細胞的質粒DNA，轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞；
(4)通過藍白斑篩選白色的大腸桿菌克隆，得到大片段DNA；
所述多片段DNA選擇如下之一：
(1)K410，K411，K412，K413和K414；
(2)TetR，VioA，VioB，VioC,VioD和VioE；
(3)TEF1p，PDX1t-TDH3p，MPE1t-FBA1p，TDH2t，CrtE，CrtI和CrtYB。
2.根據權利要求1所述的一種多片段DNA的酵母快速組裝方法，其特征在于所述含有同
源臂的DNA分子的同源臂至少是40個堿基的特異性同源臂。
3.根據權利要求1所述的一種多片段DNA的酵母快速組裝方法，其特征在于所述線性化
的酵母穿梭載體是使用內切酶對酵母穿梭載體進行單酶切后獲得。
4.權利要求1-3之一的一種多片段DNA的酵母快速組裝方法組裝的大片段DNA，所述多
片段DNA選擇如下之一：
(1)K410，K411，K412，K413和K414；
(2)TetR，VioA，VioB，VioC,VioD和VioE；
(3)TEF1p，PDX1t-TDH3p，MPE1t-FBA1p，TDH2t，CrtE，CrtI和CrtYB。
5.權利要求4的大片段DNA的用途，所述用途為組裝合成基因組結構單元，用于生產β-
胡蘿卜素或紫色桿菌素。