本發明涉及人工抗菌肽MA-D4的制備方法及其應用。本發明人工設計出人工抗菌肽MA-D4的氨基酸序列，并采用大腸桿菌偏好性密碼子設計編碼該抗菌肽的核苷酸序列；采用重疊區擴增基因拼接法合成目的基因，構建原核表達載體，并轉化至大腸桿菌BL21或Rosetta中誘導表達；表達產物經腸激酶酶切處理和鎳離子親和層析純化后，即可獲得本發明人工抗菌肽MA-D4。該抗菌肽具備較強的廣譜抗菌活性，可抑制革蘭氏陽性菌和陰性菌，同時不具有溶血活性。因此，其可作為一類新型抗菌藥物，在食品防腐、疾病治療等方面具有良好的應用前景，極具開發潛力。本發明制備方法表達效率高，分離純化簡單，生產成本低，穩定性好，可應用于規模化生產。

1.一種人工抗菌肽MA-D4，其特征在于，其是如序列表中SEQ?ID?No.1所示氨基酸序列的多肽。
2.一種多核苷酸，其特征在于，其是如序列表中SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列的多核苷酸，可編碼SEQ?
ID?No.1所示氨基酸序列。
3.一種載體，其特征在于，具備權利要求2所述的多核苷酸。
4.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，具備權利要求3所述的載體。
5.權利要求1所述的人工抗菌肽MA-D4的制備方法，包括如下步驟：
(1)根據GenBank中的抗菌肽Magainin和Dermaseptin-4成熟肽氨基酸序列，人工設計出本發明人
工抗菌肽MA-D4的氨基酸序列SEQ?ID?No.1，之后采用大腸桿菌偏好性密碼子設計編碼該抗菌肽的核苷酸
序列，并在兩端分別添加核酸限制性內切酶識別位點，形成目的基因序列SEQ?ID?No.2；
(2)采用重疊區擴增基因拼接法合成上述目的基因，設計兩兩互補的4條PCR引物，通過多步PCR
獲得的目的基因；
(3)將獲得的目的基因與原核表達質粒pET-32a(+)連接，構建原核表達載體，并轉化至大腸桿菌BL21
或Rosetta中，篩選基因工程陽性菌；
(4)添加IPTG誘導基因工程菌表達，超聲波裂解菌體后進行SDS-PAGE，檢測蛋白表達量；
(5)使用腸激酶酶切處理表達產物后，通過鎳離子親和層析純化獲得本發明人工抗菌肽MA-D4。
6.根據權利要求5所述的人工抗菌肽MA-D4的制備方法，其特征在于，所述4條PCR引物序列如SEQ?
ID?No.3～5所示。
7.權利要求1所述的人工抗菌肽MA-D4的應用，其特征在于，應用于制備抗菌劑。
8.權利要求8所述的人工抗菌肽MA-D4應用于制備抗菌劑，其特征在于，針對大腸桿菌、金黃色葡萄
球菌、枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌、豬鏈球菌2型和炭疽桿菌。