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一種立體選擇性酯酶、編碼基因、載體、工程菌及其應(yīng)用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-16
  • 技術(shù)成熟度:通過中試
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201610201866.8 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種立體選擇性酯酶、編碼基因、載體、工程菌及其應(yīng)用 
  • 項(xiàng)目單位 浙江工業(yè)大學(xué)
  • 發(fā)明人 章銀軍,汪釗,鄭建永,應(yīng)向賢,劉胤延 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 通過中試
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 尤爾柔
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-12-16  
  • 01

    項(xiàng)目簡介

    本發(fā)明提供了一種立體選擇性酯酶、編碼基因、載體、工程菌及其拆分(R,S)?N?(2,6?二甲基苯基)氨基丙酸甲酯的應(yīng)用;利用重組大腸桿菌或重組酯酶為生物催化劑同時(shí)催化拆分(R,S)?N?(2,6?二甲基苯基)氨基丙酸甲酯,生成(R)?N?(2,6?二甲基苯基)氨基丙酸,轉(zhuǎn)化率達(dá)49.8%,產(chǎn)物光學(xué)純度都在98%以上。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種立體選擇性酯酶,其特征在于所述酯酶的氨基酸序列為SEQ ID No.1所示。2. 一種權(quán)利要求1所述立體選擇性酯酶的編碼基因,其特征在于所述編碼基因的核苷酸序列為SEQ ID No.2所示。3.一種權(quán)利要求2所述編碼基因構(gòu)建的重組載體。4.一種權(quán)利要求3所述重組載體轉(zhuǎn)化得到的重組基因工程菌。5.一種權(quán)利要求2所述編碼基因在制備立體選擇性酯酶中的應(yīng)用。6.一種權(quán)利要求1所述立體選擇性酯酶在催化拆分(R,S)-N-(2,6-二甲苯基)氨基丙酸甲酯中的應(yīng)用。7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于所述應(yīng)用以含立體選擇性酯酶編碼基因的工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體、濕菌體經(jīng)超聲破碎后的上清液、或濕菌體冷凍干燥獲得的凍干菌體為催化劑,以(R,S)-N-(2,6-二甲苯基)氨基丙酸甲酯為底物,以pH6.0、0.2 M的磷酸鹽緩沖液為反應(yīng)介質(zhì),在30℃,200 rpm條件下進(jìn)行拆分反應(yīng),反應(yīng)結(jié)束后,反應(yīng)液先用乙酸乙酯萃取,分離后的水相經(jīng)鹽酸酸化、乙酸乙酯萃取,旋蒸后得到(R)-N-(2,6-二甲苯基)氨基丙酸。8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于所述催化劑質(zhì)量用量以緩沖液體積計(jì)為2~50g/L,所述底物體積終濃度以緩沖液體積計(jì)為2 ~20%。9.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于所述濕菌體按如下方法制備:將含立體選擇性酯酶編碼基因的重組大腸桿菌接種至含50 μg/ml氨芐青霉素和50 μg/ml卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基,在37℃下培養(yǎng)16 h,獲得種子液;再以體積濃度1%的接種量將種子液接種到新鮮的含50 μg/ml氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中,37℃下培養(yǎng)至菌體濃度OD600為0.4-0.8,再加入終濃度為0.2 mM的IPTG,22℃下誘導(dǎo)培養(yǎng)6~8 h,然后在4℃下10000 rpm離心10 min,收集濕菌體。10.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于所述上清液是將含立體選擇性酯酶編碼基因的工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體用50 mM、pH 8.0的Tris-HCl 緩沖液重懸,超聲波破碎,超聲2 s,間隔6 s,有效超聲時(shí)間5 min,離心,獲得上清液。
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專利技術(shù)附圖

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