本發(fā)明公開(kāi)了一種利用富馬酸發(fā)酵液制備天冬氨酸酶以及L-天冬氨酸的方法。方法包括兩個(gè)部分，一是富馬酸發(fā)酵液的清液部分培養(yǎng)大腸桿菌生產(chǎn)天冬氨酸酶，二是利用發(fā)酵液的固體沉淀部分富馬酸鈣與硫酸銨反應(yīng)生成富馬酸銨，經(jīng)過(guò)濃縮后在天冬氨酸酶的作用下生成L-天冬氨酸。該種方法實(shí)現(xiàn)了以糖基路線生產(chǎn)L-天冬氨酸，實(shí)現(xiàn)了富馬酸發(fā)酵液全利用以至達(dá)到節(jié)能減排的目標(biāo)，有效的降低了L-天冬氨酸的生產(chǎn)成本，減少了對(duì)環(huán)境的污染，使得L-天冬氨酸得到可持續(xù)的生產(chǎn)，具有較廣的工業(yè)化生產(chǎn)前景。

1.一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于包括以下步驟：
A、將微生物發(fā)酵法以葡萄糖為碳源，以CaCO₃為中和劑，發(fā)酵米根霉得到的富馬
酸發(fā)酵液的清液部分用于培養(yǎng)產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的富集培養(yǎng)并產(chǎn)酶：
(1)配制用于產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的產(chǎn)酶培養(yǎng)基
將發(fā)酵法以葡萄糖為碳源，以CaCO₃為中和劑，發(fā)酵米根霉制備富馬酸工藝的清液
部分，加入產(chǎn)天冬氨酸酶微生物培養(yǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，配制成產(chǎn)酶培養(yǎng)基；
其中，所述的發(fā)酵米根霉制備富馬酸工藝的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖130g/L，尿
素0.06g/L，KH₂PO₄0.6g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，ZnSO₄·7H₂O0.0176g/L，
FeSO₄7H₂O?0.000498g/L，CaCO₃為葡萄糖濃度的60％，pH為5.5；
所述的產(chǎn)天冬氨酸酶培養(yǎng)基所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括：蛋白胨0～6g/L，牛肉膏0～4
g/L，玉米干粉0～10g/L，硫酸鎂0～0.25g/L，硫酸二氫鉀0～0.5g/L，氯化鈉0～1g/L，
pH7.0；
(2)富集天冬氨酸酶微生物的培養(yǎng)
取一環(huán)生長(zhǎng)良好的斜面種子于產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，37℃，180r/min下恒溫?fù)u床培養(yǎng)12～
16h得到種子液；將種子液以體積比10％接種量轉(zhuǎn)接到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，溫
度37℃，通風(fēng)0.6～0.8vvm，攪拌轉(zhuǎn)速150r/min，培養(yǎng)14～16h，收獲菌體細(xì)胞；
B、由富馬酸發(fā)酵液的沉淀部分制備得到富馬酸銨底物：
按照富馬酸鈣與硫酸銨的摩爾比為1∶1.2～1∶1.5的比例，向富馬酸發(fā)酵液中的固體
沉淀部分中加入硫酸銨，在80℃的條件下反應(yīng)1～2小時(shí)，結(jié)束后過(guò)濾硫酸鈣、菌體細(xì)
胞等固體物質(zhì)獲得富馬酸銨溶液，并將其濃縮至100～300g/L，加入氨水調(diào)整pH至8.5；
C、酶催化反應(yīng)制備L-天冬氨酸：
將發(fā)酵獲得的產(chǎn)天冬氨酸酶微生物細(xì)胞濕重按1％～5％的添加量加入到富馬酸銨底
物中，置于溫度為30～37℃，攪拌轉(zhuǎn)速50～100r/min，轉(zhuǎn)化反應(yīng)3～5小時(shí)，過(guò)濾除菌
體，濾液中加入硫酸調(diào)pH至2.8～2.9，獲得L-天冬氨酸晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于所述的產(chǎn)天冬氨
酸酶微生物為大腸桿菌。