本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種β?胡蘿卜素單加氧酶的制備方法及其應(yīng)用。一種β?胡蘿卜素單加氧酶的制備方法，構(gòu)建β?胡蘿卜素單加氧酶基因的原核表達(dá)載體，將原核表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌中表達(dá)，經(jīng)Ni?NTA柱親和層析和分子篩純化后，得到純化的普β?胡蘿卜素單加氧酶。所述β?胡蘿卜素單加氧酶作為催化劑，在反應(yīng)液中催化底物β?胡蘿卜素，反應(yīng)溫度45?55℃，反應(yīng)時(shí)間20?30 h，反式視黃醛的轉(zhuǎn)化率達(dá)89.5%。本發(fā)明建立了棲熱菌β?胡蘿卜素單加氧酶制備全反式視黃醛的方法，并優(yōu)化了反應(yīng)條件，經(jīng)優(yōu)化后全反式視黃醛轉(zhuǎn)化率達(dá)到89.5%。

1. 一種β-胡蘿卜素單加氧酶的制備方法，其特征在于：構(gòu)建β-胡蘿卜素單加氧酶基因的原核表達(dá)載體，將原核表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌中表達(dá)，經(jīng)Ni-NTA柱親和層析和分子篩純化后，得到純化的β-胡蘿卜素單加氧酶；所述β-胡蘿卜素單加氧酶基因，共960堿基，核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，其編碼的β-胡蘿卜素單加氧酶，共319氨基酸，氨基酸序列如SEQID NO：4所示。2.一種由權(quán)利要求1的制備方法所制備的β-胡蘿卜素單加氧酶的應(yīng)用，其特征在于：所述β-胡蘿卜素單加氧酶作為催化劑，在反應(yīng)液中催化底物β-胡蘿卜素，反應(yīng)溫度45-55℃，反應(yīng)時(shí)間20-30 h，反式視黃醛的轉(zhuǎn)化率達(dá)89.5%；所述反應(yīng)中反應(yīng)液的成分為：50mmol/LNaCl、5 mmol/L FeSO₄·7H₂O、20 mmol/L TCEP、濃度2%的OTG、濃度1%的Tween 80、5 mmol/LDTT、50mmol/L pH 8.0的Tricine/KOH緩沖液；其中，所述催化劑的濃度為4U/mL，底物濃度為1000 mg/L。