1.一種基于人源骨架蛋白Fn3制備腦鈉肽前體抗原替代物的方法，其特征在于，包括以
下步驟：
1)、骨架蛋白Fn3展示NT-proBNP線性表位重組蛋白表達載體構建：
(1)根據Fn3骨架蛋白晶體結構，設計展示表位位置，根據模建結果，將NT-proBNP線性
表位設計在Fn3骨架蛋白的FG區，將能與抗腦鈉肽前體抗體結合的抗原表位核苷酸序列置
換骨架蛋白Fn3的編碼FG區的核苷酸序列，構成骨架蛋白Fn3與NT-proBNP線性表位融合基
因，合成Fn3展示NT-proBNP線性表位的基因片段，在融合基因下游融合編碼6個組氨酸的分
離純化標簽(His-tag)，便于分離純化：采用人纖維連接蛋白III型結構域(Fn3)蛋白為模式
基因，在基因的5′末端引入編碼6個組氨酸殘基，在FG loop區引入NT-proBNP編碼表位的核
苷酸序列CTGGAAACCTCGGGCCTGCAGGAACAACGT，以上設計合成的基因編碼Fn3展示NT-proBNP
線性表位重組蛋白， 命名為Fn3-epitope；
(2)將以上融合基因構建到大腸桿菌胞內表達載體上，融合的重組蛋白將在大腸桿菌
胞內表達：將上述設計合成的基因，用Nco I和Hind III構建到大腸桿菌表達載體pET28a
(+)上，得到重組載體pET28-Fn3-epitope；
2)、將構建的重組蛋白基因質胞內表達載體轉化到大腸桿菌工程菌株，篩選得到陽性
克隆，此陽性克隆表達的重組蛋白就展示有線性抗原表位，將鑒定過的陽性轉化子進行自
誘導表達，誘導表達3-6小時，培養基中添加與表達載體所帶抗性基因相應的抗生素；
將構建的表達載體電擊轉化大腸桿菌菌株BL21(DE3)，然后將轉化子接種到10毫升含
有Kan的LB培養基中，過夜培養，次日，以1:100接種到500毫升含有Kan的LB培養基的2升三
角瓶中，200rpm、37℃培養，直至OD600達到0.6，然后，在25-35℃、200rpm條件下添加1毫摩爾
的異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)進行誘導表達3小時，在此過程，在大腸桿菌胞內表達重組蛋
白；
其中，Kan的濃度為每毫升LB培養基中含50微克卡那霉素；LB培養基的配方為： 胰蛋白
胨(Tryptone)10g/L，酵母提取物(Yeast extract)5g/L，氯化鈉(NaCl)10g/L；
3)、收集菌體，提取可溶蛋白，用親和層析方法，分離純化重組蛋白，該蛋白即為包含有
線性抗原表位的融合蛋白：用鎳柱純化His-Tag的重組蛋白，得到純化的重組蛋白Fn3-
epitope。
2.根據權利要求1所述的一種基于人源骨架蛋白Fn3制備腦鈉肽前體抗原替代物的方
法，其特征在于，所述的純化的重組蛋白Fn3-epitope可展示腦鈉肽前體抗原表位，能夠作
為相應抗原的替代物。
展開
