本發明公開了一種具有編碼高活性反式-4-羥基-L-脯氨酸羥化酶的基因片段及其應用，對指孢囊菌（ Dactylosporangium sp . RH1）中反式-4-羥基-L-脯氨酸羥化酶（GenBankID:BAA20094.1）基因密碼子進行優化獲得 p4hyd 基因，對優化后 p4hyd 基因進行截短，獲得 P4Hyd 基因，分別構建重組質粒pET-M-3C-P4Hyd和pET-M-3C-P4Hyd，通過大腸桿菌進行原核表達，以菌體作酶源轉化生產反式-4-羥基-L-脯氨酸。實驗結果表明，以L-脯氨酸為底物，相比于pET-M-3C-P4Hyd，pET-M-3C-P4Hyd轉化生成反式-4-羥基-L-脯氨酸的最高轉化率由91.4%提高到97.4%，轉化反應時間由80小時縮短到60小時，轉化率得到明顯提高，轉化時間明顯縮短。本發明可用于生物轉化法生產L-羥脯氨酸，具有較好的工業應用前景。

1.一種編碼高活性反式-4-羥基-L-脯氨酸羥化酶的基因片段，其特征在于該片段的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。2.權利要求1所述的反式-4-羥基-L-脯氨酸羥化酶基因片段的表達產物，其特征在于氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示。3.含有權利要求2所述表達產物的工程菌的構建方法，其特征在于包括以下步驟：將所述編碼高活性反式-4-羥基-L-脯氨酸羥化酶的基因片段，與表達載體pET-M-3C連接，轉化至大腸桿菌BL21-CodonPlus(DE3)中，并誘導蛋白表達。4.權利要求1、2或3中所述基因片段的應用，其特征在于用于以L-脯氨酸為底物，生物轉化法生產反式-4-羥基-L-脯氨酸。?