1.一種分離羅替戈汀、苯海索對映異構體的方法,將磺化葡聚糖溶解于緩沖溶
液,得到含有手性選擇劑的運行緩沖液,將要分離的羅替戈汀、苯海索溶于運行緩沖
液作為待分離的樣品,通過毛細管電泳儀實現兩種藥物對映異構體的分離;
具體步驟如下:
A配制運行緩沖液和樣品
在超純水中溶解磷酸鹽配制濃度為5-100mmol/L的磷酸鹽緩沖溶液,用磷酸或
氫氧化鈉溶液調節緩沖溶液的pH值=2-7;按每毫升緩沖溶液中加入0.01-0.04g手性
選擇劑的比例,向緩沖溶液中加入手性選擇劑,溶解后用過濾膜過濾,超聲3-10分鐘,
得到運行緩沖液;所述的手性選擇劑是分子量為50萬或100萬的磺化葡聚糖;
將待分離的藥物分別溶解于超純水得到濃度為5-20mmol/L的儲備樣品,冷藏保
存,進樣時用運行緩沖液將儲備樣品進行稀釋得到濃度為0.01-1mmol/L的待分離樣
品;
B.儀器準備
分離過程在熔融石英毛細管內進行,毛細管內壁最好是未涂層的,毛細管總長為
50-70cm,內徑為25-100μm,在距離毛細管進口端40-60cm處除去毛細管的聚酰亞
胺外層以得到檢測窗口;
新的毛細管在使用之前需要進行清洗和活化,進樣前,毛細管需要用運行緩沖液
沖洗使其達到平衡,連續分析時,每次分析前依次用濃度為1mol/L的氫氧化鈉、超
純水和運行緩沖液沖洗,以保證重現性,儀器的液體冷卻系統保證所有分析均在恒溫
下進行;
C.進樣
把運行緩沖液和待分離樣品分別加入到樣品瓶中,將毛細管進樣端口和檢測端口
分別插入裝有待分離樣品和儲存廢液的樣品瓶中,樣品通過壓力方式進樣,進樣壓力
為0.5psi,進樣時間為5秒;
D分離
進樣步驟完成后,毛細管進樣端口和檢測端口再分別插入2個均裝有運行緩沖液
的樣品瓶中,用來提供高電壓的2根電極分別插入上述2個樣品瓶中,施加電壓10-30
kV,開始分離,分離過程在溫度為15-35℃范圍的恒溫下進行;采用直接紫外檢測,
檢測波長為200nm;當被分離樣品遷移至檢測窗口時,紫外吸收信號會發生變化,軟
件會記錄整個分離過程中紫外吸收信號的變化,生成色譜圖;并根據計算公式:
R s = 2 t 2 - t 1 w 1 + w 2 ]]>
直接計算出對映異構體的分離度Rs;
式中,t是對映異構體的遷移時間,w是基線處峰寬,下腳標1和2分別代表依次
經過檢測器的第1個和第2個對映異構體。
2.根據權利要求1所述的分離羅替戈汀、苯海索對映異構體的方法,其特征是步
驟A中所述的磷酸鹽是磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉;所述的過濾膜的孔徑為0.22-0.45
μm,材質為混合纖維素酯;所述的緩沖溶液的pH值=2.5-4。
3.根據權利要求1所述的分離羅替戈汀、苯海索對映異構體的方法,其特征是步
驟A中所述儲備樣品的濃度為10mmol/L,所述的超純水是電阻率>18.3MΩ·cm的純
水。
4.根據權利要求1所述的分離羅替戈汀、苯海索對映異構體的方法,其特征是步
驟D中所述的分離過程在溫度為20-25℃的恒溫下進行。
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