本發(fā)明涉及了一種組織工程皮膚的制備方法，本發(fā)明是在脫細胞豬胸主動脈血管內膜兩側分別種植成纖維細胞和表皮細胞構建而成的組織工程皮膚。與目前皮膚替代品相比較，原料來源豐富，可顯著促進創(chuàng)面愈合并加速受創(chuàng)部位血管生成，減少瘢痕增生，機械性可滿足機體要求，提高人工皮膚移植成功率。因此，本發(fā)明組織工程皮膚有應用于臨床使用的巨大潛能。

1.一種組織工程皮膚的制備方法，其特征在于：是由脫細胞豬胸主動脈血管內膜、皮膚
成纖維細胞和表皮細胞制成，是在脫細胞豬胸主動脈血管內膜兩側分別種植成纖維細胞和
表皮細胞構建而成；
所述的脫細胞豬胸主動脈血管內膜按以下方法制備：
(1)取檢疫合格月齡大于5個月的豬，無菌開腔，取胸主動脈，用醫(yī)用生理鹽水漂洗干凈
后，鈍性分離制得厚度為0.3～0.5mm的血管內膜，再用醫(yī)用生理鹽水清洗，制得豬胸主動脈
血管內膜；
(2)將步驟(1)所得的豬胸主動脈血管內膜置于1M的氯化鈉溶液中，并在37℃恒溫搖床
中以100～150r/min的轉速震蕩，每間隔6h以頻率為40KHz的超聲波震蕩5min，24h后用醫(yī)用
生理鹽水漂洗干凈；
(3)將步驟(2)得到的豬胸主動脈血管內膜置于濃度為10mg/mL的十二烷基硫酸鈉溶液
中，并在37℃恒溫搖床中以100～150r/min的轉速震蕩，每間隔6h以頻率為40KHz的超聲波
震蕩5min，12～24h后用醫(yī)用生理鹽水漂洗干凈；
(4)將步驟(3)得到的豬胸主動脈血管內膜置于濃度為2.5mg/mL的胰酶溶液中，并在37
℃恒溫搖床中以100～150r/min的轉速震蕩，每間隔6h以頻率為40KHz的超聲波震蕩5min，
24～36h后用醫(yī)用生理鹽水漂洗干凈，即得脫細胞豬胸主動脈血管內膜，貯存于75％乙醇中
備用。
2.根據(jù)權利要求1所述的組織工程皮膚的制備方法，包括培養(yǎng)基配制以及組織工程皮
膚的構建，其特征在于包括以下步驟：
a.按1：9的體積比將DMEM培養(yǎng)基與進口胎牛血清混合后，此基礎上每500mL再添加氫化
可的松100～500μg，膽固醇5～8mg，轉鐵蛋白1～5mg，維生素C10～20mg，胰島素2～5mg配制
成基礎培養(yǎng)基；再以基礎培養(yǎng)基配制以下培養(yǎng)基，其中添加物濃度為終濃度：
成纖維細胞培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基+堿性成纖維細胞生長因子0.05～0.1ng/mL；
表皮細胞培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基+牛垂體提取液50～100μg/mL+表皮細胞生長因子5～
25ng/mL+乙醇胺0.1mM+堿性成纖維細胞生長因子0.01～0.05ng/mL+氯化鈣0.05mmol/L；
b.將所述步驟(4)得到的脫細胞豬胸主動脈血管內膜用醫(yī)用生理鹽水漂洗去除酒精
后，在其一側按2×10⁵～5×10⁵個/cm²接種成纖維細胞，加入成纖維細胞培養(yǎng)基淹沒皮膚表
面，每天換液，培養(yǎng)7～10天；
c.將步驟b中得到的已接種成纖維細胞的脫細胞豬胸主動脈血管內膜置于培養(yǎng)支架
上，在未接種細胞的一側，按2×10⁵～5×10⁵個/cm²接種表皮細胞，加入表皮細胞培養(yǎng)基淹
沒材料表面，每天換液，培養(yǎng)12～18天后，掃描電鏡觀察形成表皮層和真皮層后，即得組織
工程皮膚。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述溶液中的溶劑均為超純水。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述溶液中均含有青霉素和鏈霉素，所述溶
液中青霉素與鏈霉素的濃度分別為100U/mL、100μg/mL。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述醫(yī)用生理鹽水為質量濃度為0.9％的氯
化鈉溶液。