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單克隆抗體及其應用、試劑盒、檢測銀杏葉水溶性蛋白含量的Dot-ELISA方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-08
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310740803.6 
  • 技術(專利)名稱 單克隆抗體及其應用、試劑盒、檢測銀杏葉水溶性蛋白含量的Dot-ELISA方法 
  • 項目單位 江蘇康緣藥業股份有限公司
  • 發明人 蕭偉,秦愛建,王振中,趙妮,李芳,錢琨,周軍,劉秋 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 陳穎娟
  • 發布時間 2021-12-08  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及藥物制劑檢測領域,特別涉及單克隆抗體及其應用、試劑盒、檢測銀杏葉水溶性蛋白含量的Dot?ELISA方法。本發明提供的銀杏葉水溶性蛋白的單克隆抗體由保藏號為CGMCC NO:8654的雜交瘤產生。本發明提供的Dot?ELISA方法檢測銀杏葉水溶性蛋白的檢測限低,檢測的靈敏度遠遠高于ELISA方法,且操作時間短。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種銀杏葉水溶性蛋白的單克隆抗體,其特征在于,由保藏號為
    CGMCC NO:8654的雜交瘤產生。
    2.如權利要求1所述的單克隆抗體在制備檢測銀杏葉水溶性蛋白含量的
    試劑盒中的應用。
    3.一種檢測銀杏葉水溶性蛋白含量的試劑盒,其特征在于,包括如權利
    要求1所述的單克隆抗體。
    4.一種檢測銀杏葉水溶性蛋白含量的Dot-ELISA方法,其特征在于,包
    括如下步驟:
    獲得待測樣品;
    獲得銀杏葉水溶性全蛋白,其具體制備方法為:采摘新鮮銀杏葉液氮研
    磨,加入10%的三氯乙酸-丙酮進行提取,12000rpm/min,離心1h,棄掉上清,
    加入冰浴丙酮;重復前一步操作直至上清變為清亮,離心棄掉上清;沉淀風
    干后得到含銀杏葉全蛋白;
    取硝酸纖維素膜,劃分出第一陰性對照區、第一陽性對照區和第一檢測
    區,經飽和、第一干燥,獲得第二陰性對照區、第二陽性對照區和第二檢測
    區;
    以磷酸鹽緩沖液、所述銀杏葉水溶性全蛋白、所述待測樣品作為抗原,
    取所述磷酸鹽緩沖液、所述銀杏葉水溶性全蛋白、所述待測樣品分別包被于
    所述第二陰性對照區、所述第二陽性對照區、所述第二檢測區,經第二干燥、
    封閉、洗滌、第三干燥,獲得抗原膜片;所述銀杏葉水溶性全蛋白的最低包
    被量為9.75ng;
    以權利要求1所述的單克隆抗體作為第一抗體,以酶標記的羊抗鼠IgG
    作為第二抗體,取所述第一抗體與所述抗原膜片結合,獲得第一抗體-抗原膜
    片;取所述第二抗體與所述第一抗體-抗原膜片結合,顯色,終止顯色,觀察
    所述檢測區是否出現斑點用以檢測所述待測樣品中銀杏葉水溶性蛋白含量;
    所述檢測區出現斑點,則所述待測樣品中銀杏葉水溶性蛋白含量大于或
    等于9.75ng;
    所述檢測區未出現斑點,則所述待測樣品中銀杏葉水溶性蛋白含量小于
    9.75ng;
    所述抗原的點樣量為1μL。
    5.根據權利要求4所述的Dot-ELISA方法,其特征在于,所述封閉的時
    間為1h。
    6.根據權利要求4所述的Dot-ELISA方法,其特征在于,所述第一抗體
    的稀釋倍數為1:3200~1:6400。
    7.根據權利要求4所述的Dot-ELISA方法,其特征在于,所述第二抗體
    的稀釋倍數為1:5000。
    8.根據權利要求4所述的Dot-ELISA方法,其特征在于,所述顯色的時
    間為15min~20min。
    9.根據權利要求4所述的Dot-ELISA方法,其特征在于,所述第一干燥
    為在通風櫥中干燥。
    展開

專利技術附圖

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