1.一種灰楸葉片原生質體的制備方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:(1)樣品篩選:取灰楸組培幼苗的幼嫩葉片,其中,所述的灰楸組培苗高度為6-8cm,選取從上往下第3-6片葉;(2)將選取的幼嫩葉片用刀片切成寬度不超過0.15mm的長條形,置于酶解液中,在搖床上黑暗條件下進行酶解,酶解溫度25-30℃;其中, 所述的酶解液組成:0.01M CaCl2,0.02MKCl,0.02M MES,0.1%BSA,1%-3%纖維素酶OnozukaRS,0.5%-3%離析酶Macerozyme R-10,0.3-0.7M甘露醇;(3)酶解物經300目濾網過濾,將濾液500~700轉/min離心3~7min,吸去上清液,沉淀用緩沖液重懸,重復上述離心操作1次,沉淀用緩沖液重懸,即為原生質體懸浮液。2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,還包括步驟:(4)原生質體的產量用血球計數板測定,重復3次,原生質體產量=酶液中原生質體的數量/酶解所用葉條的質量;其中,原生質體產量的單位為個/克,原生質體的數量的單位為個,酶解所用葉條的質量的單位為克。3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,還包括步驟:(5)原生質體懸浮液與0.01%酚藏花紅溶液1:1混合,染色5min,顯微鏡下測定原生質體的存活率,隨機選取5個視野進行統計,重復3次,原生質體存活率=有活力的原生質體/原生質體總數×100%。4.根據權利要求1所述的灰楸葉片原生質體的制備方法,其特征在于,步驟(2)所述的酶解時間為6-14h。5.根據權利要求1所述的灰楸葉片原生質體的制備方法,其特征在于,步驟(2)幼嫩葉片用刀片切成1.0mm×0.1mm的長條形,所述的搖床轉速為50rpm。6.根據權利要求1所述的灰楸葉片原生質體的制備方法,其特征在于,所述步驟(3)酶解物經300目濾網過濾,將濾液600轉/min離心5min,吸去上清液,沉淀用緩沖液重懸,重復上述離心操作1次,沉淀用0.5mL緩沖液重懸。7.根據權利要求6所述的灰楸葉片原生質體的制備方法,其特征在于,所述的緩沖液的配制為:0.01MCaCl2,0.02M KCl,0.02M MES,0.1%BSA,0.3-0.7M甘露醇。8.根據權利要求3所述的灰楸葉片原生質體的制備方法,其特征在于,步驟(5)所述的0.01%酚藏花紅溶液用0.6M甘露醇配制而成。
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