一種共擔載阿霉素和TRAIL的白蛋白納米粒靶向制劑及制備方法，該制劑由鹽酸阿霉素DOX·HCl、人腫瘤壞死因子細胞凋亡配體TRAIL、牛血清白蛋白BSA、聚乙烯亞胺PEI、羧甲基殼聚糖?葉酸偶聯(lián)物CMCS?FA以及注射用水、交聯(lián)劑等制成的包載阿霉素和TRAIL的白蛋白納米粒靶向給藥系統(tǒng)。通過制備載阿霉素的白蛋白納米粒，羧甲基殼聚糖?葉酸偶聯(lián)物（CMCS?FA）的合成，制備共包載阿霉素和TRAIL的葉酸靶向白蛋白納米粒，葉酸介導(dǎo)的主動靶向和腫瘤pH敏感釋藥提高藥物載體在腫瘤的富集；擔載的阿霉素和TRAIL可以產(chǎn)生協(xié)同抗癌作用，對癌細胞（包括耐藥細胞）產(chǎn)生強大的殺傷作用。

1.一種共擔載阿霉素和人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的白蛋白納米粒靶向制劑
的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下制備步驟：
（1）制備載阿霉素的白蛋白納米粒
采用去溶劑交聯(lián)法制備阿霉素白蛋白納米粒，取牛血清白蛋白適量配制水溶液，用1
摩爾每升的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0；
取牛血清白蛋白溶液1毫升，攪拌下向其滴加鹽酸阿霉素乙醇溶液4毫升，加入速度10
毫升/分；
然后，在攪拌下向上述溶液滴加4%的戊二醛乙醇溶液，繼續(xù)攪拌2小時后，轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)
蒸發(fā)器內(nèi)，在40℃真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20分鐘以除去乙醇；得到的產(chǎn)物經(jīng)10 ℃、14000 轉(zhuǎn)/
分鐘條件下離心10分鐘，除去離心上清液，再用蒸餾水重復(fù)洗滌離心兩次，棄去上清液得到
納米粒；然后向納米粒中添加適量蒸餾水，渦旋分散，得到載阿霉素的白蛋白納米粒；
（2）羧甲基殼聚糖-葉酸偶聯(lián)物 CMCS-FA 的合成：
取0.2克葉酸FA溶于10毫升二甲基亞砜中，向其中加入0.1克的N-羥基琥珀酰亞胺 NHS
和0.2 g的N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺 DCC，其中 FA/NHS/DCC摩爾比為1:2:2 ，室溫活化反應(yīng)
12小時，直到葉酸全部溶解；向上述溶液中加入1%的羧甲基殼聚糖 CMCS 的磷酸鹽緩沖液
和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽EDC，其中CMCS/FA/EDC摩爾比為1:1:1，繼
續(xù)室溫避光攪拌16小時；然后向溶液中滴加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至9.0，用pH 7.4的磷酸鹽緩沖
液透析24小時，然后用水透析24小時后，凍干處理；
（3）制備共包載阿霉素和人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的葉酸靶向白蛋白納米
粒：
利用層層自組裝技術(shù)制備共擔載阿霉素和人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的納米
粒；取載阿霉素的白蛋白納米粒溶液1毫升，向其中加入0.25% 聚乙烯亞胺水溶液0.1毫升
使納米粒表面電荷由負變正，攪拌混勻后加入10微克/毫升的人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘
導(dǎo)配體溶液，攪拌均勻后再加入1.5毫克/毫升的CMCS-FA溶液，pH8.0 磷酸鹽緩沖液配制，
使納米粒電荷由正變負，室溫攪拌30分鐘，即得。
2.按權(quán)利要求1所述的一種共擔載阿霉素和人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的白蛋
白納米粒靶向制劑的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述牛血清白蛋白溶液濃度為為
1.0-2.0%克/毫升。
3.按權(quán)利要求1所述的一種共擔載阿霉素和人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的白蛋
白納米粒靶向制劑的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述阿霉素濃度為0.01-0.05%克/
毫升。
4.按權(quán)利要求1所述的一種共擔載阿霉素和人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的白蛋
白納米粒靶向制劑的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述牛血清白蛋白溶液pH值為7.0-
9.0。
5.按權(quán)利要求1所述的一種共擔載阿霉素和人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的白蛋
白納米粒靶向制劑的制備方法，其特征在于，步驟（3）中所述加入聚乙烯亞胺和CMCS的質(zhì)量
比為1:4。