一種發酵生產胰島素原的補料培養基及補料培養優化方法，屬于微生物工程領域。本發明針對目前大腸桿菌表達胰島素原過程中發酵密度小、表達量低等不足，提出了一種含有DMEM-高糖培養基的補料培養基，以及一種將這種補料培養基應用于大腸桿菌發酵胰島素原中的分批補料優化方法。本法明涉及的培養方法工藝易于控制，通用性強，彌補了大腸桿菌表達胰島素前體的補料培養基和補料培養優化方法。

1.一種發酵生產胰島素原的補料培養基，其特征在于，它含有蛋白胨200g/L、酵母粉200g/L、硫酸銨50g/L、甘油200mL、DMEM高糖培養基200mL，補足水至1000mL，其中DMEM-高糖培養基含L-谷氨酸胺，不含丙酮酸鈉和碳酸氫鈉。2.一種將權利要求1所述補料培養基應用于發酵生產胰島素原中的補料優化方法，其特征在于，將所述補料培養基分批流加到發酵液中，其中實時補料流加速率是通過最初補料流加速率和下一時刻的比生長速率μ₀確定的，而μ₀＝（X_n/X₀）^1/n-1，其中X_n=69，X₀為測得的菌體密度，n=T-t₀，T=19，t₀為檢測菌體密度時的發酵時間。3.如權利要求2所述的補料優化方法，其特征在于，最初補料流加速率為100～400ml·h^-1。4.如權利要求2所述的補料優化方法，其特征在于，最初補料流加速率為200～400ml·h^-1。5.如權利要求2所述的補料優化方法，其特征在于，最初補料流加速率為200ml·h^-1。