1.一種制備阿卡波糖工程菌的方法，所述方法是將生產阿卡波糖的游動
放線菌中的treY基因滅活；所述滅活是通過將DNA片段M導入到游動放線
菌中，使DNA片段M與游動放線菌的treY基因發生同源重組而完成；所述
同源重組是通過將游動放線菌的菌絲與導入所述DNA片段M的重組菌共同培
養進行接合轉移而完成,在將重組菌與游動放線菌共同培養進行接合轉移之
前，將所述游動放線菌以37℃水浴20分鐘；
所述DNA片段M，自5’端到3’端分別為同源臂T1、DNA片段N和同源
臂T2；所述同源臂T1與treY基因的上游序列同源重組，所述同源臂T2與treY
基因的下游序列同源重組，滅活treY基因；所述片段N為連接片段；其中，
同源臂T1由treY基因編碼序列的5’端785bp核苷酸和treY基因上游片段組成，
同源臂T2由treY基因編碼序列的3’端930bp核苷酸和treY基因下游片段組成，
以限制性內切酶識別序列作為片段N。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述同源臂T1為包括treY
基因編碼序列的5’端785bp核苷酸的3057bp片段；所述同源臂T2為包括treY
基因編碼序列的3’端930bp核苷酸的2885bp片段；所述片段N為BamHI酶
識別序列。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述DNA片段M的序列
如SEQ?ID?NO:3所示。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述導入DNA片段M的
重組菌是將所述DNA片段M克隆至pUAmT14質粒的多克隆酶切位點而得到
重組質粒pAT-tre12，再將重組質粒pAT-tre12轉化至包含質粒pUZ8002的大
腸桿菌ET12567中所得到的重組菌；其中所述pUAmT14質粒的構建過程為：
將克隆載體pUC19以Dra?I和Ssp?I雙酶切，將質粒pIJ773以Xba?I和BstB?I
雙酶切，并補平末端，將上述兩個片段連接，得到質粒pUAmT14。
5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述游動放線菌
是Actinoplanes?sp.SN223/29。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述游動放線菌是游動放
線菌8-22。
7.根據權利要求1-6任一項所述的方法制備的阿卡波糖工程菌，其特征
在于，所述工程菌中treY基因失活。
8.根據權利要求7所述的阿卡波糖工程菌，其特征在于，所述阿卡波糖
工程菌是游動放線菌tre12-2#，所述游動放線菌tre12-2#是游動放線菌8-22的
treY基因與序列為SEQ?ID?NO:3的DNA片段M發生同源重組后產生的treY
基因失活的游動放線菌。
9.根據權利要求7或8所述的阿卡波糖工程菌在制備阿卡波糖中的應用。
10.一種制備阿卡波糖的方法，其特征在于，所述方法使用權利要求7
或8所述的阿卡波糖工程菌。
11.DNA片段M，其特征在于，所述片段M自5’端到3’端分別為同源臂
T1、DNA片段N和同源臂T2；所述同源臂T1與treY基因的上游序列同源重
組，同源臂T1由treY基因編碼序列的5’端785bp核苷酸和treY基因上游片段
組成；所述同源臂T2與treY基因的下游序列同源重組，同源臂T2由treY基
因編碼序列的3’端930bp核苷酸和treY基因下游片段組成；所述片段N為連
接片段，為限制性核酸內切酶識別序列。
12.根據權利要求11所述的DNA片段M，其特征在于，所述同源臂T1
為包括treY基因編碼序列的5’端785bp核苷酸的3057bp片段，所述同源臂T2
為包括treY基因編碼序列的3’端930bp核苷酸的2885bp片段，所述片段N為
BamHI酶識別序列。
13.根據權利要求12所述的DNA片段M，其特征在于，所述DNA片段
M的序列如SEQ?ID?NO:3所示。
14.包含權利要求11-13任一項所述的DNA片段M的質?；蛑亟M菌。
15.根據權利要求14所述的質粒或重組菌，其特征在于，所述質粒是
pAT-tre12；所述重組菌是將質粒pAT-tre12轉化至包含質粒pUZ8002的大腸桿
菌ET12567中所得到的重組菌；其中，將所述DNA片段M克隆至pUAmT14
質粒的多克隆酶切位點而得到重組質粒pAT-tre12；所述pUAmT14質粒的構建
過程為：將克隆載體pUC19以Dra?I和Ssp?I雙酶切，將質粒pIJ773以Xba?I
和BstB?I雙酶切，并補平末端，將上述兩個片段連接，得到質粒pUAmT14。
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