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一種含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-16
  • 技術(shù)成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201310159911.4 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒 
  • 項目單位 北京師范大學(xué)
  • 發(fā)明人 豆俊峰,王營營,丁愛中,謝恩,杜勇超 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 褚峰豪
  • 發(fā)布時間 2021-12-16  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明提供了一種含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒。所述含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒由菌株Stenotrophomonas acidaminiphila的菌液經(jīng)過提取與純化得到的。向加入苯并[a]蒽及基礎(chǔ)培養(yǎng)基、微量金屬液和維生素c溶液的玻璃瓶內(nèi)接種菌株Stenotrophomonas acidaminiphila,培養(yǎng)20天后得到菌液,對菌液經(jīng)過提取與純化得了到含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒。本發(fā)明得到的含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒可以構(gòu)建對苯并[a]蒽具有降解功能的菌株,提高以苯并[a]蒽為代表的多環(huán)芳烴污染物的生物降解效果,對于多環(huán)芳烴苯并[a]蒽污染土壤及水體有應(yīng)用潛力。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒,其特征在于,該降解質(zhì)粒由菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila的菌液經(jīng)過提取與純化得到的,菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila的菌種保藏號為CGMCC?No.3683,其中,從菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila中提取與純化含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒的具體方案為:?(1)向體積為500mL的錐形瓶內(nèi)加入400mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基、1.0mL微量金屬液、0.1mL維生素c溶液,搖勻后作為液體培養(yǎng)基備用;其中基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成為:NH4NO3:1.7g·L-1,KH2PO4:1.0g·L-1,K2HPO4:1.0g·L-1,MgCl2:0.30g·L-1,CaCl2·2H2O:0.15g·L-1;微量金屬液的組成為:CoCl2·6H2O:55mg·L-1,CuCl2:0.35mg·L-1,H3BO3:11.0mg·L-1,MnCl2·4H2O:45mg·L-1,Na2MoO4·2H2O:5.5mg·L-1,NiCl2·2H2O:4.5mg·L-1,ZnCl2:4.5mg·L-1;?(2)在超凈工作臺中向體積為100mL的錐形瓶中加入6.0mL濃度為1g/L的苯并[a]蒽丙酮溶液,為除去丙酮將錐形瓶開口放置2天;?(3)向步驟(2)中的錐形瓶內(nèi)加入60mL按步驟(1)配制的液體培養(yǎng)基;?(4)在超凈工作臺中挑取菌株Stenotrophomonas?acidaminiphila,將其接種至步驟(3)中的錐形瓶中,在溫度為25~30℃、轉(zhuǎn)速為100r/min的振蕩器中培養(yǎng)20~22天;?(5)將步驟(4)中的菌液轉(zhuǎn)移到容積為15mL的離心管中,在10000r/min條件下離心10min,棄去上清液;?(6)向步驟(5)中的離心管中加入10mL?pH值為9.0濃度為0.08M的NaH2PO4緩沖液,旋渦振蕩5min后再進行超聲波振蕩15min,在10000r/min條件下離心10min,棄去上清液分離出菌體;?(7)向由步驟(6)的離心管中加入7mL溶液A,然后混勻;溶液A的組成為:50mL0.45M三羥基甲基氨基甲烷-HCl,20mL0.25M?EDTA,20mL0.9M?KCl,10mL百分比濃度為2.0%的氯化十六烷基三甲胺,pH8.2;然后加入2.2mg?N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶,在0~4℃條件下振蕩10min后加入1.5mL濃度為50g/L的乙氧基化烷基硫酸鈉溶液,旋渦振蕩5min后在55℃條件下水浴振蕩1h,在10000r/min條件下離心10min,收集上清液;?(8)向由步驟(7)得到的上清液中加入1mL濃度為5.5M的醋酸鉀和0.5mL異丙醇,在0~4℃條件下振蕩15min,在10000r/min條件下離心10min,收集上清液;?(9)將由步驟(8)得到的上清液加入到離心純化柱上,將離心純化柱放入離心管中,在10000r/min條件下離心10min,倒去離心管中的液體;重復(fù)這一過程,直至所有由步驟(8)得到的上清液都經(jīng)過離心純化柱純化;?(10)向經(jīng)步驟(9)處理后的離心純化柱中加入0.5mL溶液B,溶液B的組成為:5mL4.5M鹽酸胍,10mL3.5M醋酸鉀與85mL無水乙醇,pH7.0;在0~4℃條件下振蕩15min,?在10000r/min條件下離心5min,倒去離心管中的液體;?(11)向經(jīng)步驟(10)處理后的離心純化柱中加入0.6mL溶液C,溶液C的組成為:40mL10mM三羥基甲基氨基甲烷-HCl,30mL3.0M?NaCl,30mL1.5mM?EDTA,pH8.5;在55℃條件下振蕩20min,在10000r/min條件下離心5min;將離心管中的液體重新加入到該離心純化柱中,在55℃水浴中放置10min,在10000r/min條件下離心5min;離心管中液體即為含有降解苯并[a]蒽功能基因的降解質(zhì)粒溶液,在-20℃保存?zhèn)溆谩?
    展開

專利技術(shù)附圖

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