本發(fā)明提供了一種含有能夠降解熒蒽功能基因的降解質(zhì)粒及其提取方法。所述含有能夠降解熒蒽功能基因的降解質(zhì)粒由無(wú)色桿菌Achromobacter？sp.的菌液經(jīng)過(guò)提取與純化得到的。向加入熒蒽及基礎(chǔ)培養(yǎng)基、微量金屬液和維生素c溶液的玻璃瓶?jī)?nèi)接種無(wú)色桿菌Achromobacter？sp.，培養(yǎng)20天后得到菌液，對(duì)菌液經(jīng)過(guò)提取與純化得了到含有能夠降解熒蒽功能基因的降解質(zhì)粒。本發(fā)明得到的含有能夠降解熒蒽功能基因的降解質(zhì)粒可以構(gòu)建對(duì)熒蒽具有降解功能的菌株，提高以熒蒽為代表的多環(huán)芳烴污染物的生物降解效果，對(duì)于多環(huán)芳烴熒蒽污染土壤及水體有應(yīng)用潛力。

1.一種含有能夠降解熒蒽功能基因的降解質(zhì)粒，其特征在于，該降解質(zhì)粒由無(wú)色桿菌
Achromobactersp.的菌液經(jīng)過(guò)提取與純化得到，無(wú)色桿菌Achromobactersp.的菌種保藏號(hào)為
CGMCCNo.3637，其中，從無(wú)色桿菌Achromobactersp.中提取與純化含有能夠降解熒蒽功能
基因的降解質(zhì)粒的具體方案為：
(1)向體積為500mL的錐形瓶?jī)?nèi)加入400mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基、1.0mL微量金屬液、0.1mL
維生素c溶液，搖勻后作為液體培養(yǎng)基備用；其中基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成為：NH₄NO₃：1.7g·L^-1，
KH₂PO₄：1.0g·L^-1，K₂HPO₄：1.0g·L^-1，MgCl₂：0.30g·L^-1，CaCl₂·2H₂O：0.15g·L^-1；微量金屬
液的組成為：CoCl₂·6H₂O：55mg·L^-1，CuCl₂：0.35mg·L^-1，H₃BO₃：11.0mg·L^-1，MnCl₂·4H₂O：45
mg·L^-1，Na₂MoO₄·2H₂O：5.5mg·L^-1，NiCl₂·2H₂O：4.5mg·L^-1，ZnCl₂：4.5mg·L^-1；
(2)在超凈工作臺(tái)中向體積為100mL的錐形瓶中加入6.0mL濃度為1g/L的熒蒽丙酮
溶液，為除去丙酮將錐形瓶開口放置2天；
(3)向步驟(2)中的錐形瓶?jī)?nèi)加入60mL按步驟(1)配制的液體培養(yǎng)基；
(4)在超凈工作臺(tái)中挑取無(wú)色桿菌Achromobactersp.，將其接種至步驟(3)中的錐形
瓶中，在溫度為25～30℃、轉(zhuǎn)速為100r/min的振蕩器中培養(yǎng)20～22天；
(5)將步驟(4)中的菌液轉(zhuǎn)移到容積為15mL的離心管中，在10000r/min條件下離心
10min，棄去上清液；
(6)向步驟(5)中的離心管中加入10mLpH值為9.0濃度為0.08M的NaH₂PO₄緩沖
液，旋渦振蕩5min后再進(jìn)行超聲波振蕩15min，在10000r/min條件下離心10min，棄去上
清液分離出菌體；
(7)向步驟(6)的離心管中加入7mL溶液A，然后混勻；溶液A的組成為：50mL0.45
M三羥基甲基氨基甲烷-HCl，20mL0.25MEDTA，20mL0.9MKCl，10mL百分比濃度為
2.0％的氯化十六烷基三甲胺，pH8.2；然后加入2.2mgN-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，在0～4℃
條件下振蕩10min后加入1.5mL濃度為50g/L的乙氧基化烷基硫酸鈉溶液，旋渦振蕩5min
后在55℃條件下水浴振蕩1h，在10000r/min條件下離心10min，收集上清液；
(8)向由步驟(7)得到的上清液中加入1mL濃度為5.5M的醋酸鉀和0.5mL異丙醇，
在0～4℃條件下振蕩15min，在10000r/min條件下離心10min，收集上清液；
(9)將由步驟(8)得到的上清液加入到離心純化柱上，將離心純化柱放入離心管中，
在10000r/min條件下離心10min，倒去離心管中的液體；重復(fù)這一過(guò)程，直至所有由步驟(8)
得到的上清液都經(jīng)過(guò)離心純化柱純化；
(10)向經(jīng)步驟(9)處理后的離心純化柱中加入0.5mL溶液B，溶液B的組成為：5mL
4.5M鹽酸胍，10mL3.5M醋酸鉀與85mL無(wú)水乙醇，pH7.0；在0～4℃條件下振蕩15min，
在10000r/min條件下離心5min，倒去離心管中的液體；
(11)向經(jīng)步驟(10)處理后的離心純化柱中加入0.6mL溶液C，溶液C的組成為：40
mL10mM三羥基甲基氨基甲烷-HCl，30mL3.0MNaCl，30mL1.5mMEDTA，pH8.5；在
55℃條件下振蕩20min，在10000r/min條件下離心5min；將離心管中的液體重新加入到該
離心純化柱中，在55℃水浴中放置10min，在10000r/min條件下離心5min；離心管中液體
即為含有能夠降解熒蒽功能基因的降解質(zhì)粒溶液，在-20℃保存?zhèn)溆谩?br/>