本發明屬于維生素C生物發酵技術領域，具體的說是Vc第二步生物發酵中一種利用混合菌生物發酵轉化山梨糖為2-酮基-L-古龍酸的方法。Vc二步發酵生產工藝的種子液逐級擴大，發酵培養時將A菌系和B菌系的種子液，以體積百分比15-20％的總接種量接入發酵罐中發酵培養至發酵終點（即至發酵液中殘余山梨糖濃度≤1mg/ml），實現利用混合菌發酵轉化山梨糖為2-酮基-L-古龍酸;其中A菌系由伴生菌蠟樣芽孢桿菌/伴生菌巨大芽孢桿菌與產酸菌生酮基古龍酸菌組成；B菌系由伴生菌蘇云金芽孢桿菌和產酸菌生酮基古龍酸菌組成；采用本發明的三菌混合發酵新方法，發揮了兩種伴生菌的各自優勢，可縮短發酵周期6-8小時，降低能耗10-15％，提高發酵轉化率2-4％。

1.一種利用三種菌混合發酵轉化山梨糖2-酮基-L-古龍酸的方法,其
特征在于：Vc二步發酵生產工藝的種子液逐級擴大，發酵培養時將A菌系
和B菌系的種子液，以體積百分比15-20%的總接種量接入發酵罐中發酵培
養至發酵終點，實現利用混合菌發酵轉化山梨糖為2-酮基-L-古龍酸;
其中A菌系由伴生菌蠟樣芽孢桿菌/伴生菌巨大芽孢桿菌與產酸菌生酮
基古龍酸菌組成；B菌系由伴生菌蘇云金芽孢桿菌和產酸菌生酮基古龍酸菌
組成；
所述A菌系和B菌系的種子液按體積比2:1～10:1的比例混合接入發
酵罐；
將所述兩種菌系分別加入到發酵罐中，兩種先后加入的菌系在20小時
內接種到發酵罐中使總接種量達到15-20%。
2.按權利要求1所述的利用三種菌混合發酵轉化山梨糖2-酮基-L-古
龍酸的方法,其特征在于：所述在Vc二步發酵過程中A菌系和B菌系經過
連續三級種子擴大培養，繼而得到的三級種子液再接種于發酵罐；其中A
菌系和B菌系連續三級種子擴大培養分別為以體積比1-5%、5-10%和5-10%
的接種量分別作為三級種子擴大培養的各級接種量，同時各級培養溫度為
27-31℃，發酵時間在6-14小時，通風量為1:0.8-1.0；每級種子達到種液
中古龍酸含量達3.0-10.0mg/ml，轉種到下一級。
3.按權利要求2所述的利用三種菌混合發酵轉化山梨糖2-酮基-L-古
龍酸的方法,其特征在于：將連續擴大培養的A菌系和B菌系的三級種子液
接種于發酵罐中，在27-31℃、罐壓0.005-0.02Mpa，pH6.0-8.0下進行發
酵培養,發酵過程中流加L-山梨糖，直至發酵液中殘余山梨糖濃度≤
1mg/ml，從而實現利用混合菌發酵轉化山梨糖為2-酮基-L-古龍酸。
4.按權利要求3所述的利用三種菌混合發酵轉化山梨糖2-酮基-L-古龍
酸的方法,其特征在于：所述發酵過程中間斷或連續的流加底物L-山梨糖，
流加速率為2-10m³/小時，至發酵液中山梨糖終濃度達7-10mg/ml。