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一種花臉蘑蛋白LsAPII及其制備方法和應(yīng)用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-14
  • 技術(shù)成熟度:可以量產(chǎn)
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN200910093039.1 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種花臉蘑蛋白LsAPII及其制備方法和應(yīng)用 
  • 項目單位 北京市農(nóng)林科學(xué)院
  • 發(fā)明人 燕繼曄,李興紅,周瑩,嚴(yán)紅,馬鳳金 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 可以量產(chǎn)
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 李安
  • 發(fā)布時間 2021-12-14  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種花臉蘑蛋白LsAPII,其N端氨基酸序列為:DGEYVNDLEGTISVDA;其制備方法為將花臉蘑子實(shí)體粉末在磷酸緩沖液中浸泡,離心,取上清液;然后分別加入硫酸銨至飽和度為50%和70%,在0~6℃下放置6~16h,分別離心,收取上清液或沉淀;再用磷酸緩沖液溶解,透析、超濾管超濾、陰離子交換柱分離和0.3mol/L氯化鈉溶液洗脫,即得花臉蘑蛋白LsAPII。本發(fā)明LsAPII對煙草花葉病毒抑制效果好;其次確定LsAPII為單一蛋白,為其遺傳工程應(yīng)用提供了基礎(chǔ);還有LsAPII為天然提取物,對人類和環(huán)境均無害;另外LsAPII制備方法簡單,原料易得,成本較低。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種抗植物病毒的花臉蘑蛋白LsAPII,所述花臉蘑蛋白來自花臉蘑
    (Lepista?sordida),其N端氨基酸序列為:DGEYVNDLEGTISVDA;經(jīng)SDS聚丙
    烯酰胺凝膠電泳鑒定,所述花臉蘑蛋白LsAPII的分子量為17.8KD;所述的花
    臉蘑蛋白LsAPII,按照如下方法制備:
    (1)、將花臉蘑子實(shí)體粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液20ml
    中浸泡2h,10000rpm離心25min,棄沉淀,取上清液;
    (2)、向步驟(1)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為50%,在4℃放置
    8h,10000rpm離心25min,棄沉淀,取上清液;
    (3)、向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為70%,在4℃放置
    8h,10000rpm離心25min,收取沉淀;
    (4)、用0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液溶解步驟(3)所得沉淀,然后經(jīng)3
    倍重量的重蒸餾水透析8小時,將透析得到的透析液分別用Millipore公司生
    產(chǎn)的Amicon?Ultra-153KD和30KD的超濾管進(jìn)行超濾截留,留取分子量在9~
    90KD的蛋白溶液;
    (5)將步驟(4)所得蛋白溶液經(jīng)陰離子交換柱分離,用0.3mol/L的氯
    化鈉洗脫,收集洗脫液,洗脫液中所含物質(zhì)即為花臉蘑蛋白LsAPII。
    2.權(quán)利要求1所述的花臉蘑蛋白LsAPII的制備方法,包括如下步驟:
    (1)、將花臉蘑子實(shí)體粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液20ml
    中浸泡2h,10000rpm離心25min,棄沉淀,取上清液;
    (2)、向步驟(1)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為50%,在4℃放置
    8h,10000rpm離心25min,棄沉淀,取上清液;
    (3)、向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為70%,在4℃放置
    8h,10000rpm離心25min,收取沉淀;
    (4)、用0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液溶解步驟(3)所得沉淀,然后經(jīng)3
    倍重量的重蒸餾水透析8小時,將透析得到的透析液分別用Millipore公司生
    產(chǎn)的Amicon?Ultra-153KD和30KD的超濾管進(jìn)行超濾截留,留取分子量在9~
    90KD的蛋白溶液;
    (5)將步驟(4)所得蛋白溶液經(jīng)陰離子交換柱分離,用0.3mol/L的氯化
    鈉洗脫,收集洗脫液,洗脫液中所含物質(zhì)即為花臉蘑蛋白LsAPII。
    3.權(quán)利要求1所述的花臉蘑蛋白LsAPII在防治煙草花葉病毒病上的應(yīng)用。
    展開

專利技術(shù)附圖

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