本發(fā)明公開了一種利用克雷伯氏肺炎桿菌兩段發(fā)酵生產(chǎn)2-酮基-D-葡萄糖酸的方法，包括：第一階段主要進(jìn)行克雷伯氏肺炎桿菌的菌體生長(zhǎng)，第二階段主要進(jìn)行2-酮基-D-葡萄糖酸合成。本發(fā)明生產(chǎn)2-酮基-D-葡萄糖酸的方法，具有較高底物轉(zhuǎn)化效率，又具有較快的生產(chǎn)強(qiáng)度并獲得較高2-酮基-D-葡萄糖酸產(chǎn)物終濃度。

1.一種利用克雷伯氏肺炎桿菌兩段發(fā)酵生產(chǎn)2-酮基-D-葡萄糖酸的方法，其特征在于，
包括：第一階段主要進(jìn)行克雷伯氏肺炎桿菌的菌體生長(zhǎng)，第二階段主要進(jìn)行2-酮基-D-葡萄
糖酸合成；
所述方法，其步驟包括：
1）第一階段發(fā)酵培養(yǎng)
配制培養(yǎng)基，滅菌后，在培養(yǎng)基中，接入克雷伯氏肺炎桿菌進(jìn)行好氧培養(yǎng)，并保持充足
供氧以及在該培養(yǎng)過程中，利用堿控制發(fā)酵液pH處于中性或接近中性條件；
所述步驟1）中，培養(yǎng)基包括：底物葡萄糖、氮源和無機(jī)鹽；其中，氮源選自：酵母粉、
酵母膏、蛋白胨、玉米漿、硫酸銨、尿素和硝酸銨；無機(jī)鹽選自：鈉鹽、鎂鹽、鐵鹽、磷酸
鹽和錳鹽；
步驟1）的好氧培養(yǎng)的溫度為20～45℃，待菌生長(zhǎng)到菌體濃度為OD₆₀₀1～20時(shí)，結(jié)束第
一階段培養(yǎng)；
步驟1）的發(fā)酵液pH處于中性或接近中性條件為發(fā)酵液pH處于6.5～7.5；
2）第二階段發(fā)酵培養(yǎng)
第一階段培養(yǎng)結(jié)束后，繼續(xù)進(jìn)行菌體的發(fā)酵培養(yǎng)，并停止或減慢堿的加入，利用菌體生
長(zhǎng)產(chǎn)生的有機(jī)酸使得培養(yǎng)基的pH逐漸降低到酸性條件或用酸調(diào)節(jié)發(fā)酵液處于酸性條件，然后
用堿控制發(fā)酵液穩(wěn)定于酸性條件；
所述步驟2）中，第二階段發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為20～45℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～50小時(shí)；
步驟2）的用酸調(diào)節(jié)發(fā)酵液處于酸性條件中，酸選自：2-酮基-D-葡萄糖酸、乙酸、乳酸、
琥珀酸、鹽酸、硝酸、磷酸和硫酸；
步驟2）的酸性條件為發(fā)酵液pH處于4～6；
3）在發(fā)酵培養(yǎng)過程中，當(dāng)培養(yǎng)基中的底物葡萄糖消耗到0～50g/L時(shí)，補(bǔ)加葡萄糖。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述好氧培養(yǎng)的溫度為35～40℃，待菌生
長(zhǎng)到菌體濃度為OD₆₀₀5～15時(shí)，結(jié)束第一階段培養(yǎng)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1）、2）中，堿選自：氫氧化鈉、
氫氧化鉀、氨水、碳酸鈣、碳酸鈉和碳酸氫鈉。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述第二階段發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為35～40℃；
步驟2）的酸性條件為發(fā)酵液pH處于4.5～5.5。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟3）中，當(dāng)培養(yǎng)基中的底物葡萄糖
消耗到20～40g/L時(shí)，補(bǔ)加葡萄糖。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述克雷伯氏肺炎桿菌為2,3-丁二醇合成
途徑阻斷的克雷伯氏肺炎桿菌。