1.一種由海洋微生物菌株Y112制備α-環糊精葡萄糖基轉移酶的方法,包括下列步驟:
1)、海洋微生物菌株Y112粗酶液的制備
在裝種子培養基液30mL的三角瓶中接種海洋微生物菌株Y112后,30℃、200r/min下活
化22h,以4%(V/V)的接種量接種至裝有25mL發酵培養基的三角瓶中,27℃、230r/min培養
50h,收集發酵液在10000g的離心力條件下離心15min,上清為粗酶液;所述種子培養基的組
成:每升培養基含可溶性淀粉10g,蛋白胨5g,酵母浸粉5g,K2HPO4 1g,MgSO4·7H2O 0.15g,
NaCl 50g,121℃滅菌20min,所述發酵培養基的組成:每升培養基含玉米淀粉10g,蛋白胨
5g,酵母浸粉5g,K2HPO4 1g,MgSO4·7H2O 0.15g,NaCl 50g,121℃滅菌20min;所述海洋微生
物菌株Y112于2015年7月13日保藏于中國武漢中國典型培養物保藏中心,保藏號為CCTCC
NO:M2015447;
2)、乙醇分級沉淀
一級沉淀:向步驟1的粗酶液中徐徐加入無水乙醇,使乙醇的最終體積分數為20%—
40%,靜置,離心取上清液;
二級沉淀:向一級沉淀得上清液中繼續加入無水乙醇,使乙醇的最終體積分數為40%-
55%,靜置,離心,待沉淀風干后用磷酸緩沖液溶解成溶液;
3)、凝膠層析
先用pH7.2磷酸鈉緩沖液平衡Superdex 200分子篩層析柱,將步驟2得到的酶液上樣,
然后用相同緩沖液進行洗脫,流速為2mL/min,得到若干洗脫峰,其中只有主峰有活性,對其
進行收集濃縮;
4)、DEAE-Sepharose離子交換層析
先用pH 7.2磷酸鈉緩沖液平衡DEAE-Sepharose離子交換層析柱,將步驟3得到的酶液
上樣,然后用含0-1mol/L的相同緩沖液進行線性梯度洗脫,流速為2mL/min,得到三個洗脫
峰,其中僅第二洗脫峰進行收集濃縮,制得產品單一純度高的α-環糊精葡萄糖基轉移酶。
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