本發明涉及一種由海洋微生物菌株Y112制備α?環糊精葡萄糖基轉移酶的方法,包括海洋微生物菌株Y112粗酶液的制備、乙醇分級沉淀、凝膠層析和DEAE?Sepharose離子交換層析,制備α?環糊精葡萄糖基轉移酶產品單一純度高,純度提高了12.4倍，回收率為57.5％。將在醫藥、食品、化工、化妝品、工業和農業以及分析化學等方面得到廣泛的應用。

1.一種由海洋微生物菌株Y112制備α-環糊精葡萄糖基轉移酶的方法,包括下列步驟:
1)、海洋微生物菌株Y112粗酶液的制備
在裝種子培養基液30mL的三角瓶中接種海洋微生物菌株Y112后，30℃、200r/min下活
化22h，以4％(V/V)的接種量接種至裝有25mL發酵培養基的三角瓶中，27℃、230r/min培養
50h，收集發酵液在10000g的離心力條件下離心15min，上清為粗酶液；所述種子培養基的組
成：每升培養基含可溶性淀粉10g，蛋白胨5g，酵母浸粉5g，K₂HPO₄ 1g，MgSO₄·7H₂O 0.15g，
NaCl 50g，121℃滅菌20min,所述發酵培養基的組成：每升培養基含玉米淀粉10g，蛋白胨
5g，酵母浸粉5g，K₂HPO₄ 1g，MgSO₄·7H₂O 0.15g，NaCl 50g，121℃滅菌20min；所述海洋微生
物菌株Y112于2015年7月13日保藏于中國武漢中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC
NO：M2015447；
2)、乙醇分級沉淀
一級沉淀：向步驟1的粗酶液中徐徐加入無水乙醇，使乙醇的最終體積分數為20％—
40％,靜置，離心取上清液；
二級沉淀：向一級沉淀得上清液中繼續加入無水乙醇，使乙醇的最終體積分數為40％-
55％，靜置，離心，待沉淀風干后用磷酸緩沖液溶解成溶液；
3)、凝膠層析
先用pH7.2磷酸鈉緩沖液平衡Superdex 200分子篩層析柱，將步驟2得到的酶液上樣，
然后用相同緩沖液進行洗脫，流速為2mL/min，得到若干洗脫峰，其中只有主峰有活性，對其
進行收集濃縮；
4)、DEAE-Sepharose離子交換層析
先用pH 7.2磷酸鈉緩沖液平衡DEAE-Sepharose離子交換層析柱，將步驟3得到的酶液
上樣，然后用含0-1mol/L的相同緩沖液進行線性梯度洗脫，流速為2mL/min，得到三個洗脫
峰，其中僅第二洗脫峰進行收集濃縮,制得產品單一純度高的α-環糊精葡萄糖基轉移酶。