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由海洋微生物菌株Y112制備α-環糊精葡萄糖基轉移酶的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-26
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201510438950.7 
  • 技術(專利)名稱 由海洋微生物菌株Y112制備α-環糊精葡萄糖基轉移酶的方法 
  • 項目單位 中國水產科學研究院黃海水產研究所
  • 發明人 孫謐,郝建華 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王思月
  • 發布時間 2021-09-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種由海洋微生物菌株Y112制備α?環糊精葡萄糖基轉移酶的方法,包括海洋微生物菌株Y112粗酶液的制備、乙醇分級沉淀、凝膠層析和DEAE?Sepharose離子交換層析,制備α?環糊精葡萄糖基轉移酶產品單一純度高,純度提高了12.4倍,回收率為57.5%。將在醫藥、食品、化工、化妝品、工業和農業以及分析化學等方面得到廣泛的應用。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種由海洋微生物菌株Y112制備α-環糊精葡萄糖基轉移酶的方法,包括下列步驟:
    1)、海洋微生物菌株Y112粗酶液的制備
    在裝種子培養基液30mL的三角瓶中接種海洋微生物菌株Y112后,30℃、200r/min下活
    化22h,以4%(V/V)的接種量接種至裝有25mL發酵培養基的三角瓶中,27℃、230r/min培養
    50h,收集發酵液在10000g的離心力條件下離心15min,上清為粗酶液;所述種子培養基的組
    成:每升培養基含可溶性淀粉10g,蛋白胨5g,酵母浸粉5g,K2HPO4 1g,MgSO4·7H2O 0.15g,
    NaCl 50g,121℃滅菌20min,所述發酵培養基的組成:每升培養基含玉米淀粉10g,蛋白胨
    5g,酵母浸粉5g,K2HPO4 1g,MgSO4·7H2O 0.15g,NaCl 50g,121℃滅菌20min;所述海洋微生
    物菌株Y112于2015年7月13日保藏于中國武漢中國典型培養物保藏中心,保藏號為CCTCC
    NO:M2015447;
    2)、乙醇分級沉淀
    一級沉淀:向步驟1的粗酶液中徐徐加入無水乙醇,使乙醇的最終體積分數為20%—
    40%,靜置,離心取上清液;
    二級沉淀:向一級沉淀得上清液中繼續加入無水乙醇,使乙醇的最終體積分數為40%-
    55%,靜置,離心,待沉淀風干后用磷酸緩沖液溶解成溶液;
    3)、凝膠層析
    先用pH7.2磷酸鈉緩沖液平衡Superdex 200分子篩層析柱,將步驟2得到的酶液上樣,
    然后用相同緩沖液進行洗脫,流速為2mL/min,得到若干洗脫峰,其中只有主峰有活性,對其
    進行收集濃縮;
    4)、DEAE-Sepharose離子交換層析
    先用pH 7.2磷酸鈉緩沖液平衡DEAE-Sepharose離子交換層析柱,將步驟3得到的酶液
    上樣,然后用含0-1mol/L的相同緩沖液進行線性梯度洗脫,流速為2mL/min,得到三個洗脫
    峰,其中僅第二洗脫峰進行收集濃縮,制得產品單一純度高的α-環糊精葡萄糖基轉移酶。
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專利技術附圖

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