本發(fā)明公開(kāi)了一種高特異性生產(chǎn)α-環(huán)糊精的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶突變體，屬于酶工程領(lǐng)域。本發(fā)明對(duì)來(lái)源于Paenibacillus macerans JFB 05-01的CGTase進(jìn)行改造，對(duì)CGTase的145位的Asp，146位的Arg和147位的Asp進(jìn)行定點(diǎn)突變，獲得的單突變體酶的β-環(huán)糊精生產(chǎn)能力較野生型CGTase降低，α-環(huán)糊精生產(chǎn)能力有所增加，主產(chǎn)物α-環(huán)糊精的特異性增加；對(duì)CGTase進(jìn)行上述突變位點(diǎn)的組合突變，獲得雙突變體及三突變體；這些突變體與野生型CGTase相比β-環(huán)糊精生產(chǎn)能力顯著降低，α-環(huán)糊精生產(chǎn)能力有所增加，主產(chǎn)物α-環(huán)糊精的特異性增加，更利于α-環(huán)糊精的工業(yè)化生產(chǎn)。

1.一種環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的突變體，其特征在于，相對(duì)于具有SEQ?ID?NO:1所示氨
基酸序列的CGTase，包括一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸殘基的變化，所述變化與CGTase產(chǎn)α-環(huán)
糊精的特異性相關(guān)；所述氨基酸殘基為第145位天冬氨酸Asp、第146位精氨酸Arg或第147
位天冬氨酸Asp；
所述一個(gè)氨基酸殘基的變化得到的突變體為：
(1)第145位天冬氨酸發(fā)生突變，得到突變體D145H；
(2)第146位精氨酸發(fā)生突變，得到突變體：R146G、R146A、R146V、R146I、R146L、
R146M、R146F、R146Y、R146W或R146P；
(3)第147位天冬氨酸發(fā)生突變，得到突變體：D147G、D147A、D147V、D147I、D147L、
D147M、D147F、D147Y、D147W或D147P；
所述2個(gè)氨基酸殘基的變化得到的突變體為：D145H/R146V、D145H/R146P、
D145H/D147V、D145H/D147P、R146V/D147V、R146V/D147P、R146P/D147V或R146P/D147P；
所述3個(gè)氨基酸殘基的變化得到的突變體為：D145H/R146V/D147V、
D147H/R146V/D147P、D145H/R146P/D147V或D145H/R146P/D147P。
2.編碼權(quán)利要求1所述CGTase突變體的基因序列。
3.攜帶權(quán)利要求2所述DNA序列的質(zhì)粒或細(xì)胞。
4.權(quán)利要求3所述的細(xì)胞，其特征在于，是微生物細(xì)胞。
5.獲得權(quán)利要求1所述突變體的方法，其特征在于，可通過(guò)定點(diǎn)突變或定向進(jìn)化獲得突
變體。
6.權(quán)利要求1所述突變體在α-環(huán)糊精生產(chǎn)中的應(yīng)用。