本發明公開了一種生物催化不對稱還原制備(R)-鄰氯扁桃酸甲酯的方法及所用的重組載體和基因工程菌。本方法包括在pH 6-8中，在葡萄糖的存在下，以共表達重組還原酶和重組葡萄糖脫氫酶的基因工程菌濕菌體或其凍干細胞為催化劑，以鄰氯苯甲酰甲酸甲酯為底物，進行生物轉化反應，其中所述的重組還原酶是重組醛酮還原酶。本基因工程菌整細胞同時表達醛酮還原酶和葡萄糖脫氫酶，可以實現細胞內輔酶NADP的高效再生。因此不需要添加輔酶，就可催化高濃度鄰氯苯甲酰甲酸甲酯完全轉化成單一構型的(R)-鄰氯扁桃酸甲酯。因輔酶價格昂貴，本發明極大的降低了生產成本，且反應條件溫和，環境友好，操作簡便，具有很好的工業應用前景。

1.一種生物催化不對稱還原制備(R)-鄰氯扁桃酸甲酯的方法，包括在pH6-8中，在葡萄糖的存在下，以共表達重組還原酶和重組葡萄糖脫氫酶的基因工程菌濕菌體或其凍干細胞為催化劑，以鄰氯苯甲酰甲酸甲酯為底物，進行生物轉化反應，其特征在于，所述的重組還原酶是重組醛酮還原酶，所述的重組醛酮還原酶來源于枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)，氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：2所示。?2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還加入輔酶NADP⁺，所述的NADP⁺用量不超過1.0mmol/L。?3.一種重組載體，其特征在于，含有編碼醛酮還原酶和編碼葡萄糖脫氫酶的堿基序列，所述的編碼醛酮還原酶的堿基序列，?（1）是編碼氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：2所示的重組醛酮還原酶的堿基序列；或者?（2）是序列表SEQ?ID?NO：1的第1至843位所示的堿基序列；?所述的編碼葡萄糖脫氫酶的堿基序列，?（1）是編碼氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：3所示的重組葡萄糖脫氫酶的堿基序列；或者?（2）是序列表SEQ?ID?NO：1的第859至1644位所示的堿基序列。?4.如權利要求3所述的重組載體，其特征在于，所述的重組載體的出發載體是質粒pET28a。?5.一種基因工程菌，其特征在于，包含如權利要求3～4任一項所述的重組載體。?6.如權利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌為大腸桿菌，該基因工程菌包含如權利要求4所述的重組載體。?7.如權利要求5或6所述的基因工程菌在生物催化不對稱還原鄰氯苯甲酰甲酸甲酯制備(R)-鄰氯扁桃酸甲酯中的應用。?8.一種發酵培養如權利要求6所述的基因工程菌的方法，其特征在于，包括將如權利要求6所述的大腸桿菌接種至含卡那霉素的LB培養基中培養，?當培養液的光密度OD₆₀₀達到0.5-0.7時，加入終濃度為0.1-1mmol/L的異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，25℃培養，繼續誘導8-16小時。?