本發(fā)明公開了一種可溶性淀粉底物特異性提高的環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶，屬于遺傳工程和酶工程領(lǐng)域。本發(fā)明將來源于P.macerans strain JFB05-01(CCTCC NO:M208063)的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶作為原始CGTase，通過在原始CGTase的N端分別融合2種自組雙親短肽，構(gòu)建了兩種融合酶—SAP1-CGTase和SAP2-CGTase。與原始CGTase相比，它們以可溶性淀粉為糖基供體時，合成AA-2G產(chǎn)量分別提高了約1.33倍和2.36倍。因此，這些融合酶比原始環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶更利于利用可溶性淀粉為糖基供體生產(chǎn)AA-2G。

1.一種可溶性淀粉底物特異性提高的環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶，其特征在于，是在環(huán)糊精葡萄糖基
轉(zhuǎn)移酶N-末端融合了自組雙親短肽，構(gòu)建短肽融合型環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶；所述自組雙親短肽
的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示；所述短肽融合型環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶的氨
基酸序列如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示。
2.攜帶編碼權(quán)利要求1所述環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶的基因的質(zhì)粒、基因工程菌或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。
3.一種產(chǎn)權(quán)利要求1所述酶的基因工程菌的構(gòu)建方法，具體步驟如下：
1)采用化學(xué)全合成或PCR方法克隆編碼所述短肽融合型環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因；
2)將步驟1)獲得的短肽融合型環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因連接到大腸桿菌表達(dá)載體，
得到重組表達(dá)載體；
3)將步驟2)獲得的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌Escherichia?coli?BL21(DE3)得到基因工
程菌。
4.一種應(yīng)用權(quán)利要求3所述方法構(gòu)建得到的大腸桿菌基因工程菌。
5.一種應(yīng)用權(quán)利要求4所述基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的方法，以產(chǎn)短肽融
合型環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的基因工程菌為生產(chǎn)菌株，活化后按4％接種量將種子發(fā)酵液接到
含100μg/mL氨芐青霉素的TB液體培養(yǎng)基；在30℃搖床培養(yǎng)至OD₆₀₀＝0.6，加入0.1mM終
濃度的IPTG誘導(dǎo)胞外表達(dá)，并在25℃搖床繼續(xù)培養(yǎng)發(fā)酵90h后，將發(fā)酵液于4℃、10000rpm
離心20min除菌體，收集富含環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的上清液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，向所述上清液中加入70％固體硫酸銨鹽析過夜，
4℃、10000rpm離心20min，取沉淀物用含20mM磷酸鈉、0.5M氯化鈉、20mM咪唑、pH7.4
的緩沖液A溶解，并在緩沖液A中透析過夜后，通過0.22μm膜過濾后制成上樣樣品；Ni
親和柱用緩沖液A平衡后，將上樣樣品吸入Ni柱，使之完全吸附后，分別用緩沖液A、含
20-480mM咪唑的緩沖液A、含480mM咪唑的緩沖液A洗脫，流速1mL/min，檢測波長為
280nm，分部收集含CGTase酶活的洗脫液；活力組分在pH＝6的50mM磷酸鈉緩沖液中透
析過夜后，分別得到純化的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示的融合酶。
7.權(quán)利要求1所述環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶在生產(chǎn)2-O-α-D-吡喃型葡萄糖基-L-抗壞血酸中的應(yīng)用。