本發明公開了一種棉花真葉直接分化組織培養方法及其專用培養基。本發明提供的專用培養基是棉花葉片直接分化出胚性愈傷組織時所用的培養基，它是在MSB1基本培養液中，添加如下物質得到的培養基：KT、6-BA、2，4-D，IAA，葡萄糖和凝膠劑；上述KT的終濃度是0.005-0.15mg/L、6-BA終濃度是0.005-0.15mg/L、2，4-D的終濃度是0.0001-0.001mg/L、IAA的終濃度是0.001-0.02mg/L、葡萄糖的終濃度是25-35g/L、Gel rite的終濃度是1.8-2.5g/L。本發明的方法是利用田間棉株的葉片作為外植體建立組織培養體系，最終建立葉片直接誘導胚性愈傷組織的、穩定高效的組織培養體系。

1.一種棉花葉片直接誘導胚性愈傷組織的培養基，是在MSB1基本培養液中添加
如下物質得到的培養基：KT、6-BA、2，4-D、IAA、碳源和凝膠劑；
所述MSB1基本培養液的溶劑是水、溶質如下所示：
MSB1基本培養液的溶質

所述培養基中KT的終濃度是0.005-0.15mg/L、6-BA終濃度是0.005-0.15mg/L、
2，4-D的終濃度是0.0001-0.001mg/L、IAA的終濃度是0.001-0.02mg/L。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：所述凝膠劑是瓊脂粉、卡拉膠
或Gelrite；所述碳源是葡萄糖或蔗糖。
3.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于：所述培養基中KT、6-BA、2，4-D、
IAA、葡萄糖與Gelrite的終濃度如下：
KT為0.005-0.15mg/L、6-BA為0.005-0.15mg/L、2，4-D為0.0001-0.001mg/L，
IAA為0.001-0.02mg/L，葡萄糖為25-35g/L和Gelrite為1.8-2.5g/L。
4.一種生產棉花再生苗的方法，包括以下步驟：
1)將棉花葉片置于權利要求1-3任一所述的培養基中培養，得到胚性愈傷組織；
2)將步驟1)得到的胚性愈傷組織在胚狀體萌發培養基中繼代培養，獲得胚狀體，
得到棉花再生苗。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述胚狀體萌發培養基，是在MSB1
基本培養液中，添加KT、6-BA、蔗糖和Gelrite得到的培養基；所述胚狀體萌發培養
基中KT的終濃度是0.001-0.1mg/L，6-BA的終濃度為0.005-0.15mg/L，蔗糖
25-35g/L，Gelrite的終濃度是2.0-2.5g/L；所述MSB1基本培養液的溶劑是水、溶質
如下所示：
MSB1基本培養液的溶質

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述胚狀體萌發培養基中KT的終濃
度是0.001-0.1mg/L，6-BA的終濃度為0.005-0.15mg/L，蔗糖的終濃度為
30g/L，Gelrite的終濃度是2.2g/L。
7.如權利要求6所述的方法，其特征在于：所述胚狀體萌發培養基中KT的終濃
度是0.01mg/L，6-BA的終濃度為0.01mg/L，蔗糖的終濃度為30g/L，Gelrite的
終濃度是2.2g/L。
8.如權利要求4-7任一所述的方法，其特征在于：所述棉花葉片是經過預處理
的，所述預處理是將棉花葉片用0.1％的HgCl₂進行消毒，然后用無菌水沖洗至少一次。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于：所述棉花葉片是真葉。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于：所述棉花是中棉所24、中棉所27
或冀合321。