本發明為一種非疾病診斷用途的基于硼酸介導的聚合酶鏈反應檢測DNA中5?羥甲基胞嘧啶的生化分析方法。本發明結合葡萄糖基化反應，利用硼酸及其衍生物試劑可與葡萄糖基化5?羥甲基胞嘧啶中的鄰二醇發生的共價作用，顯著增加被復制堿基單元的體積，有效抑制聚合酶擴增反應的特點，提出硼酸介導的DNA聚合酶鏈擴增反應，可特異性地識別特定基因/片段中的5?羥甲基胞嘧啶。本發明涉及的方法不受酶切位點限制，可適用于各種生物樣品DNA序列中5?羥甲基胞嘧啶的生化分析鑒定。本方法具有廣闊的應用前景，對于進一步闡明5?羥甲基胞嘧啶的生物學功能具有重要意義。

1.一種非疾病診斷用途的基于硼酸或其衍生物介導的聚合酶鏈反應(PCR)檢測DNA中
5-羥甲基胞嘧啶的生化分析方法，其特征在于：DNA鏈中的5-羥甲基胞嘧啶可被葡萄糖基化
修飾，其鄰二醇可與硼酸或其衍生物發生共價作用，顯著抑制含葡萄糖基化5-羥甲基胞嘧
啶DNA片段的復制與擴增；若DNA鏈不含5-羥甲基胞嘧啶其復制與擴增則不受影響，通過擴
增曲線Ct值的變化對5-羥甲基胞嘧啶進行定量檢測。
2.基于權利要求1所述方法，其操作步驟包括：首先，利用葡萄糖基化反應，將DNA中5-
羥甲基胞嘧啶轉化成葡萄糖基化5-羥甲基胞嘧啶，從而與5-甲基胞嘧啶以及胞嘧啶相區
分；其次，利用硼酸或其衍生物試劑和葡萄糖基鄰位二醇之間的反應，引入阻礙DNA復制的
基團，從而來抑制特定基因序列片段正常的聚合酶鏈反應，使反應產率降低；同時，在葡萄
糖基化反應基礎上，不添加硼酸或其衍生物試劑，則特定基因/片段是正常的聚合酶鏈反
應，在基因水平實現對5-羥甲基胞嘧啶的選擇性識別；最后，采用實時熒光定量聚合酶鏈反
應檢測硼酸或其衍生物試劑對DNA復制過程的影響，過擴增曲線Ct值的變化來對5-羥甲基
胞嘧啶進行定量檢測。
3.基于權利要求1所述的方法，硼酸或其衍生物試劑是指硼酸、苯硼酸、3-氯苯基硼酸、
2-(2’-氯芐氧基)苯基硼酸、3-(單磺酰胺)苯硼酸或其他可與鄰二醇作用的硼酸類衍生物
試劑。
4.基于權利要求1所述的方法，其特征在于使用聚合酶鏈反應程序是：起始95℃預變性
2分鐘；循環程序：95℃變性15秒，57℃退火15秒，25℃延伸60秒，共40個循環。
5.基于權利要求1所述的方法，其特征在于可應用于各種非疾病診斷目的的生物、細
胞、組織、各種核酸序列中5-羥甲基胞嘧啶的分析檢測。