本發明提供了一種用于評價轉基因水稻對土壤微生物多樣性影響的水稻愈傷組織制備方法。本發明以C葡萄糖(D-GLUCOSE(U-13C6,99%))作為培養基的碳源，對轉基因及非轉基因水稻的愈傷組織進行繼代培養，通過C穩定性同位素豐度檢測確定得到了含一定豐度C的轉基因及非轉基因水稻愈傷組織。上述水稻愈傷組織可用于快速準確評價轉基因水稻植株降解對土壤微生物多樣性的影響，對研究轉基因水稻土壤微生物群落結構及其生態安全性評價具有重要意義。

1.一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：其制備方法包括以下步驟：1）水稻種子的消毒；2）用NB培養基進行水稻種子愈傷的誘導及繼代培養；3）用NBc培養基進行水稻愈傷組織的繼代培養；4）檢測水稻愈傷組織中的¹³C豐度；其具體步驟為：1）取成熟的水稻種子，分別用質量分數為70%乙醇、0.1%?Tween20、10%?NaClO和無菌水進行種子消毒；2）消毒后的種子濾干后接種到NB培養基上，于27-29℃生化培養箱暗培養10-20天，幼胚生出愈傷組織，去掉幼胚將愈傷組織轉接到NB培養基上繼代2-3次，每代培養10-20天；3）選取長勢良好的愈傷組織接種到NBc培養基上進行繼代培養1-2次，每代培養10-20天；4）挑取用NBc培養基繼代培養后的愈傷組織，用蒸餾水洗凈愈傷組織上殘留的培養基，然后將愈傷組織烘干磨碎后進行¹³C穩定性同位素豐度檢測；NBc培養基配方為：硝酸鉀2830?mg·L^-1、硫酸銨463?mg·L^-1、磷酸二氫鉀400?mg·L^-1、硫酸鎂185?mg·L^-1、氯化鈣166?mg·L^-1、硼酸3?mg·L^-1、硫酸錳47.58?mg·L^-1、硫酸鋅2?mg·L^-1、碘化鉀0.75?mg·L^-1、鉬酸鈉0.25?mg·L^-1、硫酸銅0.025?mg·L^-1、氯化鈷0.025?mg·L^-1、硫酸亞鐵27.8?mg·L^-1、乙二胺四乙酸二鈉37.3?mg·L^-1、肌醇100?mg·L^-1、鹽酸硫胺素10?mg·L^-1、鹽酸吡哆醇1?mg·L^-1、尼克酸1?mg·L^-1、水解酪蛋白300?mg·L^-1、谷氨酰胺250?mg·L^-1、脯氨酸500?mg·L^-1、甘氨酸2?mg·L^-1、2,?4-D?2?mg·L^-1、¹³C葡萄糖30000?mg·L^-1、瓊脂2400?mg·L^-1，pH5.8-5.9；NB培養基配方：硝酸鉀2830?mg·L^-1、硫酸銨463?mg·L^-1、磷酸二氫鉀400?mg·L^-1、硫酸鎂185?mg·L^-1、氯化鈣166?mg·L^-1、硼酸3?mg·L^-1、硫酸錳47.58?mg·L^-1、硫酸鋅2?mg·L^-1、碘化鉀0.75?mg·L^-1、鉬酸鈉0.25?mg·L^-1、硫酸銅0.025?mg·L^-1、氯化鈷0.025?mg·L^-1、硫酸亞鐵27.8?mg·L^-1、乙二胺四乙酸二鈉37.3?mg·L^-1、肌醇100?mg·L^-1、鹽酸硫胺素10?mg·L^-1、鹽酸吡哆醇1?mg·L^-1、尼克酸1?mg·L^-1、水解酪蛋白300?mg·L^-1、谷氨酰胺250?mg·L^-1、脯氨酸500mg·L^-1、甘氨酸2?mg·L^-1、2,?4-D?2?mg·L^-1、蔗糖30000?mg·L^-1、瓊脂2400?mg·L^-1、pH5.8-5.9。2.根據權利要求1所述的一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：通過檢測¹³C豐度確定獲得了含有¹³C的水稻愈傷組織。