本發明涉及一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法。本發明以康寧木霉(Trichoderma koningii)與米根霉(Rhizopus oryzae)為纖維素酶生產菌，接種孢子液或二級種子液于固態或液態培養基中，通過控制培養基的組成、混菌培養過程中康寧木霉與米根霉的生物量以及其它培養條件，可使濾紙酶活力、β-葡萄糖苷酶活力比康寧木霉單菌發酵分別提高60％～100％、400％～500％，并明顯縮短發酵時間。本發明并通過控制兩種微生物的接種量或接種時機，使之形成偏利的微生態關系，從而有利于纖維素酶的分泌并改善酶系的組成。本發明操作簡單易行，成本低，具有良好的應用前景。

1.一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，其特征在于，將康寧木霉與米根霉兩種微生物接種于固態或液態發酵培養基中，采用固態發酵工藝或液態發酵工藝，混合培養生產纖維素酶，通過控制兩種微生物的生物量培養條件來提高纖維素酶的活力，并改善酶系的組成；所述的固態發酵工藝中的固態發酵培養基的制備方法是：將稻草粉、蔗渣粉、麩皮粉、小麥秸稈粉中的一種或一種以上，與1～3倍重量Mandels營養液混合，調節pH4.5～5.0，110～121℃高壓蒸汽滅菌20～30分鐘；所述的液態發酵工藝中的液態發酵培養基的制備方法是：稻草粉、蔗渣粉、麩皮粉、小麥秸稈粉中的一種或一種以上，共1～5份，加入100份Mandels營養液，調節pH4.5～5.0，裝入自動發酵罐，110～121℃高壓蒸汽滅菌15～30分鐘。2.根據權利要求1所述的微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，其特征在于所述的固態發酵工藝的步驟是：(1)液體制種：選擇菌種康寧木霉和米根霉為生產菌株，分別經斜面試管培養、搖瓶擴大培養或發酵罐再擴大培養制備所需二級液體菌種；(2)將康寧木霉和米根霉的斜面菌種制成孢子懸浮液，每毫升孢子數為10⁷～10⁸個，以2～10∶1的體積比例混合，按固態發酵培養基重量的6～14％接種或將康寧木霉和米根霉的二級液體菌種，以2～10∶1的體積比例混合，按固態發酵培養基重量的6～14％接種；接種后在25～35℃、空氣相對濕度70～90％下培養72～144小時，30～48小時翻曲一次，即成固體酶曲；(3)將固體酶曲按1∶8～10的重量比加水浸泡1～4小時后過濾，過濾液即為纖維素酶的提取液；(4)將上述提取液濃縮至原來體積的2/10～4/10可制成高活性液態纖維素酶制劑，濃縮液經噴霧干燥可制成粉狀高活性纖維素酶制劑。3.根據權利要求1所述的微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，所述的液態發酵工藝的步驟是：(1)液體制種：選擇菌種康寧木霉和米根霉為生產菌株，分別經斜面試管培養、搖瓶擴大培養或發酵罐再擴大培養制備所需二級液體菌種；(2)先將康寧木霉的二級液體菌種，按液態發酵培養基體積的1～9％接種量接種于液態發酵培養基，20～35℃下通氣培養24～72小時后，再接種1～9％體積的米根霉二級液體菌種，20～35℃下繼續通氣培養24～96小時，將培養液過濾，過濾液即為原酶液；(3)將上述原酶液濃縮至原來體積的2/10～3/10即為高活性液態纖維素酶制劑，濃縮液經噴霧干燥可制成粉狀高活性纖維素酶制劑。