本發明公開了一種采用自克隆工程菌發酵生產L-山梨糖的方法，屬于采用代謝工程調控策略優化發酵過程技術領域。本發明采用代謝工程的手段，獲得自克隆氧化葡萄糖酸桿菌工程菌，以其為生產菌株，通過發酵工藝優化使山梨醇脫氫酶的活性提高了1.33倍；以山梨醇為唯一碳源，發酵36h后，L-山梨糖產量達到225g/L，與出發菌株節相比將發酵時間縮短了12h。本發明通過調控山梨醇脫氫途徑，成功實現了山梨醇快速化地導向目標代謝產物山梨糖的目的。為今后利用代謝工程手段改造菌株促進目標產物過量積累提供了一定的借鑒意義。

1.一種采用自克隆工程菌發酵生產L-山梨糖的方法，其特征在于以氧化葡萄糖酸桿菌工程菌
為生產菌株，接種到種子培養基中，500mL搖瓶裝液50mL，于30°C、200rpm條件下培養
20-24h；按15%的接種量將培養好的種子接入發酵培養基，30°C，200rpm條件下培養36h；
所述氧化葡萄糖酸桿菌工程菌過量表達外源山梨醇脫氫酶基因，其構建方法為：通過化學全
合成方法獲得Genbank:NC_006677.1所示山梨醇脫氫酶基因，克隆到表達載體pBBR1MCS-2，
進一步轉化氧化葡萄糖酸桿菌獲得自克隆基因工程菌。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于種子培養基組成為：山梨醇150g，酵母膏6g，
CaCO₃2g，pH4.8-5.1，自來水定容至1L。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于發酵培養基組成為：山梨醇250g，酵母膏2g，
CaCO₃2g，pH4.8-5.1，自來水定容至1L。