本發(fā)明公開(kāi)了一種固定化木瓜蛋白酶的方法，包括以下步驟：1)、將聚丙烯腈樹(shù)脂用反應(yīng)溶劑浸泡溶脹后，加入氨基葡萄糖鹽酸鹽和KCO，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行反應(yīng)；然后過(guò)濾；2)、所得濾渣先用無(wú)水乙醇浸泡洗滌，然后依次進(jìn)行酸洗和水洗；接著真空干燥，得PAN?GA載體；3)、在PAN?GA載體中加入Nal0溶液避光氧化，洗滌后，再加入pH為6.5～8.5的磷酸緩沖液和木瓜蛋白酶進(jìn)行固定化反應(yīng)，接著過(guò)濾分離；所得濾餅沖洗后干燥，得固定化木瓜蛋白酶。本發(fā)明所采用的用于固定化木瓜蛋白酶的載體(PAN?GA)，能克服現(xiàn)有技術(shù)所合成的載體在酶固定化過(guò)程中，由于剛性碰撞造成的酶活力損失。

1.固定化木瓜蛋白酶的方法，其特征是包括以下步驟：
1)、稱取0.1mg聚丙烯腈樹(shù)脂，加入100～300ml的反應(yīng)溶劑，浸泡溶脹10～14h后；加入
0.68g的氨基葡萄糖鹽酸鹽和0.88g粉末狀的K₂CO₃，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下以150～250rpm的攪拌速
度先攪拌1～3h；然后升溫至100℃，繼續(xù)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌反應(yīng)12h；反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾，收
集濾渣；
所述反應(yīng)溶劑為乙二醇；
2)、將步驟1)所得的濾渣先用無(wú)水乙醇浸泡洗滌至洗滌液為無(wú)色，然后依次進(jìn)行酸洗
和水洗；然后于45～55℃真空干燥至恒重，得PAN-GA載體；
所述酸洗為用1mol/L的鹽酸溶液浸泡2～4小時(shí)，所述水洗為：用去離子水洗滌至洗滌
液為中性；
3)、稱取10mg的PAN-GA載體，加入濃度為2.5～3.5mg/mL的Nal0₄溶液2.8～3.2mL，避光
氧化28～32min，然后用無(wú)水乙醇和水依次洗滌后；再加入8～12ml的0.1mol/L、pH為7的磷
酸緩沖液，然后加入0.18～0.22mg木瓜蛋白酶；于20～30℃的固定化溫度、轉(zhuǎn)速為100～
150rpm下恒溫振蕩固定3.5～4.5h后，過(guò)濾分離；所述Nal0₄溶液以pH＝4.0，0.1mol/L的
HAc-NaAc緩沖液作為溶劑進(jìn)行配制；
所得濾餅用pH為6.5～8.5的磷酸緩沖液進(jìn)行反復(fù)沖洗后，于36～38℃的真空干燥器內(nèi)
干燥4.5～5.5h，得固定化木瓜蛋白酶。