本發明公開了一種灰樹花菌絲體抗腫瘤糖蛋白及制備方法，屬于生物工程技術領域。該糖蛋白是以深層發酵的灰樹花菌絲體為原料，并經勻漿破碎、冷水浸提、離心、取上清液、硫酸銨沉淀、透析、DEAE-Sepharose？Fast？Flow和Superdex75？prep？grad柱層析等步驟系統分離純化獲得的。該糖蛋白是多糖和蛋白質的復合物，其中多糖含量為2～10%，由阿拉伯糖、果糖、甘露糖和葡萄糖等4種單糖組成；蛋白質含量為30～90%，由天冬氨酸、蛋氨酸和谷氨酸等17種氨基酸組成；其分子量范圍為30～90KDa。該糖蛋白對人胃癌細胞SGC-7901和人乳腺癌細胞MCF-7的生長有抑制作用，可用于制備可能的抗癌藥物。同時本發明能普遍適用于各種藥食用真菌深層發酵所得菌絲體中糖蛋白的分離純化。

1.一種具有抗腫瘤活性的灰樹花菌絲體糖蛋白的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行：（1）將馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養基斜面保存的灰樹花（Grifolafrondosa）菌種活化，切割成小塊接種到種子培養基中25℃，150r/min條件下培養6d后收集種子液，接種于發酵罐中進行發酵10天，8000r/min離心后獲得灰樹花菌絲體；所得菌絲體的產率為30g/L；（2）將灰樹花菌絲體加入1~4倍體積的水后勻漿破碎，4~20℃浸提，離心，棄沉淀，取上清液,上清液濃縮后加入硫酸銨至飽和度為60～90％，靜置24~48h，高速離心取沉淀，加少量水復溶沉淀,將沉淀復溶液置入8000~14000Da的透析袋，去離子水透析，收集透析液后濃縮，進行DEAE-SepharoseFastFlow柱層析，依次用蒸餾水和0.1，0.3，0.5mol/LNaCl溶液為洗脫液進行階段式洗脫，收集0.3mol/LNaCl溶液洗脫的糖蛋白復合物D2組分，濃縮后進行Superdex^TM75prepgrad柱層析，用蒸餾水洗脫，收集S1組分，冷凍干燥S1組分即得到灰樹花菌絲體糖蛋白；該糖蛋白中多糖含量為2～10%，由阿拉伯糖，果糖，甘露糖和葡萄糖4種單糖組成；蛋白質含量為30～90%，由天冬氨酸、蛋氨酸和谷氨酸等17種氨基酸組成；其分子量范圍為30～90KDa；步驟（1）中馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養基組成如下：馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L；種子培養基組成如下：葡萄糖20g/L，蛋白胨2g/L，KH₂PO₄2g/L，MgSO₄·7H₂O1g/L，玉米漿15g/L。