本發(fā)明公開了一種含紫杉醇培養(yǎng)組合物及其制備方法，制備方法包括：將無花果曲霉菌種子液接入含有南方紅豆杉和蛇六谷的紅豆杉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后置于交變磁場環(huán)境中再培養(yǎng)，得紅豆杉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物，再經(jīng)亞臨界水萃取，得到紅豆杉發(fā)酵亞臨界萃取物Ⅰ；將產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌種子液接入含有萃取剩余物Ⅱ的內(nèi)生真菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物Ⅲ；組合物為紅豆杉發(fā)酵亞臨界萃取物Ⅰ和內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物Ⅲ，具有良好的護(hù)肝功能。其制備該方法能夠有效地將各原料中的營養(yǎng)成分和有效成分進(jìn)行生物降解和轉(zhuǎn)化，有助于提高最終產(chǎn)品中活性成分的含量和活性。

1.一種含紫杉醇培養(yǎng)組合物的制備方法，其特征在于，包括步驟：
(1)取活化后的產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌菌種接種到液體MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4h-6h，離心收集
第一菌體；將第一菌體懸浮在含膽鹽的液體MRS培養(yǎng)基中于20℃-30℃孵育3h-40h，離心收
集第二菌體；將第二菌體經(jīng)PBS緩沖液清洗干凈后重新懸浮于液體MRS培養(yǎng)基中，震蕩搖勻，
在20℃-30℃培養(yǎng)2天-10天，得到產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌種子液；
(2)取活化后的無花果曲霉菌菌種接種到液體MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4h-6h，離心收集第三
菌體，將第三菌體懸浮在含NaCl的液體MRS培養(yǎng)基中于20℃-28℃孵育0.5h-3h，離心收集第
四菌體；將第四菌體經(jīng)PBS緩沖液清洗干凈后重新懸浮于液體MRS培養(yǎng)基中，震蕩搖勻得到
第四菌體液，將第四菌體液接種到含NaCl的液體MRS培養(yǎng)基中于20℃-28℃培養(yǎng)5h-30h，得
到無花果曲霉菌種子液；
(3)將步驟(2)的無花果曲霉菌種子液接入紅豆杉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，在16℃-30℃培
養(yǎng)3天-30天，然后置于交變磁場環(huán)境中再培養(yǎng)5天-20天，培養(yǎng)產(chǎn)物經(jīng)真空冷凍干燥、粉碎后
得紅豆杉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物；所述紅豆杉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中含有南方紅豆杉和蛇六谷；
步驟(3)中，所述紅豆杉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基每1L中含有5.5g-9.0g南方紅豆杉和0.3g-
3.0g蛇六谷；
(4)將步驟(3)的紅豆杉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)亞臨界水萃取，得到紅豆杉發(fā)酵亞臨界萃取物
Ⅰ，萃取后所剩的殘?jiān)?jīng)真空冷凍干燥后得到萃取剩余物Ⅱ；
(5)將步驟(1)的產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌種子液接入內(nèi)生真菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，調(diào)pH值為
3-7，在15℃-25℃培養(yǎng)5天-25天，離心，得到內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物Ⅲ；所述內(nèi)生真菌液體發(fā)酵
培養(yǎng)基中含有萃取剩余物Ⅱ；
步驟(5)中，所述內(nèi)生真菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基每1L中含有0.2g-1g萃取剩余物Ⅱ；
所述含紫杉醇培養(yǎng)組合物為紅豆杉發(fā)酵亞臨界萃取物Ⅰ和內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物Ⅲ。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述含膽鹽的液體MRS培
養(yǎng)基中膽鹽的質(zhì)量百分含量為0.1％-0.5％；
步驟(2)中，所述含NaCl的液體MRS培養(yǎng)基中NaCl的質(zhì)量百分含量為2％-6％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述第一菌體與用于懸浮
第一菌體的含膽鹽的液體MRS培養(yǎng)基的體積比為1:1-3，第二菌體與用于懸浮第二菌體的液
體MRS培養(yǎng)基的體積比為1:1-3；
步驟(2)中，所述第三菌體與用于懸浮第三菌體的含NaCl的液體MRS培養(yǎng)基的體積比為
1:1-3，第四菌體與用于懸浮第四菌體的液體MRS培養(yǎng)基的體積比為1:1-3，第四菌體液的接
種量為1％-2％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述交變磁場環(huán)境中磁場
強(qiáng)度為0.2mT-6mT，磁場頻率為3Hz-40Hz；
步驟(4)中，所述亞臨界水萃取的條件為：水料質(zhì)量比為15-50:1，萃取壓力在5MPa-
20MPa，萃取溫度為100℃-180℃，萃取時(shí)間為10min-60min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述無花果曲霉菌種子液
的接入量為紅豆杉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5％-25％；
步驟(5)中，所述產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌種子液的接入量為內(nèi)生真菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基體積
的3％-20％。
6.一種含紫杉醇培養(yǎng)組合物，其特征在于，采用權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的制備方法制
備得到。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含紫杉醇培養(yǎng)組合物，其特征在于，所述組合物由40重量份-
70重量份紅豆杉發(fā)酵亞臨界萃取物Ⅰ和10重量份-35重量份內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物Ⅲ組成。
8.一種含紫杉醇培養(yǎng)組合物的應(yīng)用，其特征在于，根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的含紫杉醇
培養(yǎng)組合物在制備護(hù)肝的保健品或藥品中的應(yīng)用。