本發(fā)明公開了一種制備重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白的方法，包括如下步驟：a)構(gòu)建含有重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白基因的表達質(zhì)粒；b)將步驟a)得到的含有重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白基因的表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到酵母工程菌中，建立表達重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白的酵母工程菌種子庫；c)將步驟b)得到的酵母工程菌種子庫中的酵母種子菌以5％～30％(v/v)的接種量接種于酵母培養(yǎng)基中，溶氧不小于10％的飽和度，25℃～37℃培養(yǎng)60～90小時；d)收集上清發(fā)酵液，分離純化出所述重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白。本發(fā)明還涉及一種用上述方法制得的重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白，該種重組融合蛋白的純度高、生物活性強，作為藥物的活性成分，可以安全、有效地應(yīng)用于人體。

1.一種制備重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白的方法，其特征在于，
它包括如下步驟：
a)構(gòu)建含有重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白基因的表達質(zhì)粒，其中，
所述表達質(zhì)粒能在酵母工程菌中組成型表達；
b)將步驟a)得到的含有重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白基因的表
達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到酵母工程菌中，建立表達重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白
的酵母工程菌種子庫；
c)將步驟b)得到的酵母工程菌種子庫中的酵母種子菌以5％～30％v/v
的接種量接種于酵母培養(yǎng)基中，溶氧不小于10％的飽和度，25℃～37℃培養(yǎng)
60～90小時；
d)收集上清發(fā)酵液，分離純化出所述重組人血清白蛋白與干擾素α融合
蛋白；
其中，所述酵母工程菌是釀酒酵母；所述酵母培養(yǎng)基是由0.5％～1.5％w/v
的蛋白胨、1.5％～2.5％w/v的酵母提取物、2.0％w/v的葡萄糖或2.0％w/v蔗糖、
2ppm～4ppm?Fe²⁺、2ppm～4ppm?Cu²⁺、2ppm～4ppm?Mn²⁺、以及7ppm～14ppm?Zn²⁺
組成的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述重組人血清白蛋白與干
擾素α融合蛋白中的干擾素α選自干擾素α-2a、干擾素α-1b、或干擾素α-2b。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟c)中培養(yǎng)的第
12～16個小時在10升酵母培養(yǎng)基中流加0.5～1.5升20％w/v的葡萄糖或0.5～1.5
升20％w/v蔗糖，在第38～42個小時再流加0.5～1.5升乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于，在所述步驟c)的整個培
養(yǎng)過程中不補加氮源。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母培養(yǎng)基的起始pH
值為5.5～6.5。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟d)中，所述分
離純化的方法是采用層析方法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述層析方法選自親和層析、
凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、反向?qū)游龌蚱浣M合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述分離純化的方法為：采
用陽離子交換層析捕獲發(fā)酵液中的重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白，先
后經(jīng)過疏水層析以及陰離子交換層析兩步精細純化，最終得到含有所述重組人
血清白蛋白與干擾素α融合蛋白的樣品。