1.一種茭白總蛋白質的提取純化方法，所述方法包括：
(1)菰黑粉菌的分離及培養：將菰黑粉菌冬孢子在PSA平板上培養
3～5d，挑取特征菌落再次接種到PSA平板上純化培養15～20d后，
用4～5mm打孔器于生長活躍的菌落邊緣打孔，將圓形菌塊接種
到PSA平板上，培養條件為：24～28℃，相對濕度75～85％；
(2)茭白組織培養：以茭白中雄茭莖部的互生側芽為培養材料，接種
在愈傷誘導培養基上，培養室溫度控制在25±2℃，光照強度為
2000～3000lx，光照時間為15～18h/d；
(3)互作培養：選取步驟(2)得到的生長良好的茭白愈傷組織，轉
移到中間挖孔的水瓊脂培養基上；將步驟(1)中分離培養的
1～1.5cm2菰黑粉菌菌落接種到覆蓋有賽璐玢膜的PSA培養基上
培養3～4天后，將賽璐玢膜及菰黑粉菌菌落一起移到培養著茭白
愈傷組織的水瓊脂培養基上；
(4)取互作培養10～20天的茭白愈傷組織碎片、液氮研磨，得粉末；
(5)取步驟(4)所得粉末，用蛋白提取液1于-20～-10℃懸浮沉淀0.5～2
小時，離心，棄上清液，得沉淀1；所述蛋白提取液1為含有10％
三氯乙酸和0.07％β-巰基乙醇的丙酮溶液；
(6)取步驟(5)所得沉淀1，用蛋白提取液2于-20～10℃懸浮清洗
0.5～2小時，離心，棄去上清液，取沉淀重復上述懸浮清洗和離
心步驟1～4次，得沉淀2；所述蛋白提取液2為含0.07％β-巰基
乙醇的丙酮溶液；
(7)將步驟(6)所得沉淀2干燥，用蛋白裂解液室溫下裂解0.5～2
小時；裂解產物離心，取上清液，即為含有所述茭白總蛋白質的
溶液；所述蛋白裂解液組成如下：尿素6.8～7.2mol/L，硫脲
1.9～2.1mol/L，CHAPS?3.5～4.3％，花萼海綿誘癌素4.8～5.2％，DTT
0.7～1.2％，PMSF?0.8～1.1mmol/L，溶劑為水。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(4)中研磨步驟為：
取剪碎的茭白愈傷組織碎片，加入組織研磨劑PVP-40和石英砂、液氮
研磨成粉末。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述PVP-40與茭白愈傷組織碎
片質量之比為1∶8～12。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白提取液1為終濃度
為10％三氯乙酸和終濃度為0.07％β-巰基乙醇的丙酮溶液，加入量為
3.0～3.5mL/g茭白愈傷組織碎片。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白提取液2為終濃度
為0.07％β-巰基乙醇的丙酮溶液，加入量為3.0～3.5mL/g茭白愈組織傷
碎片。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(7)中蛋白裂解液組成
如下：尿素7mol/L，硫脲2mol/L，CHAPS?4％，花萼海綿誘癌素5％，
DTT?1％，PMSF?1mmol/L，溶劑為水；所述蛋白裂解液加入量為25mL/g
沉淀2。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(4)～(7)方法如下：
(a)取互作培養10～20天的茭白愈傷組織，清洗、剪碎，加入質量為茭
白愈傷組織質量10％的PVP-40和適量石英砂，液氮研磨成粉末；
(b)取步驟(a)所得粉末，用蛋白提取液1于-20℃懸浮沉淀1小時，4
℃、13000rpm離心20～30min，棄上清液，得沉淀1；所述蛋白提取
液1為終濃度為10％三氯乙酸和終濃度為0.07％β-巰基乙醇的丙酮
溶液；
(c)取步驟(b)所得沉淀1，用蛋白提取液2于-20℃懸浮清洗1小時，
4℃、13000rpm離心20～30min，棄去上清液，取沉淀；所述蛋白提
取液2為終濃度為0.07％β-巰基乙醇的丙酮溶液；
(d)重復步驟(c)操作3次，得沉淀2；
(e)將步驟(d)所得沉淀2干燥，用蛋白裂解液溶解，室溫下放置裂解
1小時；裂解產物離心，取上清液，即為含有所述茭白總蛋白質的溶
液；所述蛋白裂解液組成如下：尿素7mol/L，硫脲2mol/L，CHAPS
4％，花萼海綿誘癌素5％，DTT?1％，PMSF?1mmol/L，溶劑為水。
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