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同型半胱氨酸的檢測方法及其診斷試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-18
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310078940.8 
  • 技術(專利)名稱 同型半胱氨酸的檢測方法及其診斷試劑盒 
  • 項目單位 蘇州博泰安生物科技有限公司
  • 發明人 夏東元 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 馮春旖
  • 發布時間 2021-07-18  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種同型半胱氨酸的檢測方法及其診斷試劑盒,該方法選擇了抗SAH抗體,并建立了SAH-DNA引物,選擇了特定的與該DNA引物互補的DNA模板以及合適的DNA多聚酶,建立了DNA多聚酶反應體系。當待測樣品中的HCY在SAM的存在下由甲基轉移酶轉變成SAH,該生成的SAH會與檢測體系中抗SAH抗體結合,則檢測體系中剩余部分的抗SAH抗體會與體系中SAH-DNA引物結合,所形成的結合物將抑制DNA多聚酶的活性并阻止新的雙鏈DNA的形成,通過測定新雙鏈DNA的含量來檢測樣品中HCY的含量。該檢測方法快速準確且操作簡便,且建立在該檢測方法上的診斷試劑盒使用起來精準可靠,簡便易行,且操作成本低廉,有助于進行廣泛推廣。<!--1-->
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種非診斷目的的同型半胱氨酸的檢測方法,其特征在于:包括以下步
    驟:
    (1)選擇同型半胱氨酸HCY的甲基轉移酶產物S-腺苷-L-同型半胱氨酸
    SAH的特異性抗體,即抗SAH抗體;
    (2)針對(1)中所選擇的抗SAH抗體,制備能夠與該抗SAH抗體特異
    性結合的SAH-DNA引物,并選擇與該SAH-DNA引物中的DNA引物互補的
    DNA模板,建立DNA多聚酶反應體系;
    (3)選擇DNA多聚酶;
    (4)將待測樣品中未知量的HCY在過量S-腺苷-L-蛋氨酸的存在下由甲基
    轉移酶轉變成SAH,將該生成的SAH和已知并過量的(1)中所述抗SAH抗體
    結合;將該已知并過量抗SAH抗體中未與所述生成的SAH結合的部分與繼續
    添加的已知量并過量(2)中所述SAH-DNA引物結合,所形成的結合物將抑制
    (3)中所述DNA多聚酶的活性并阻止新的雙鏈DNA的形成;
    (5)通過測定形成的新的雙鏈DNA的含量來檢測樣品中HCY的含量。
    2.根據權利要求1所述的非診斷目的的同型半胱氨酸的檢測方法,其特征
    在于:制備SAH-DNA引物時通過在合適的DNA引物上引入能夠與SAH交聯
    的可交聯基團。
    3.根據權利要求2所述的非診斷目的的同型半胱氨酸的檢測方法,其特征
    在于:所述可交聯基團為羧基,該羧基能夠被活化成活化酯基團,該活化酯基
    團能夠和SAH中的氨基形成肽鍵。
    4.根據權利要求1所述的非診斷目的的同型半胱氨酸的檢測方法,其特征
    在于:所述SAH-DNA引物在同一時刻僅能與抗SAH抗體和DNA多聚酶中的
    一種相結合。
    5.根據權利要求1所述的非診斷目的的同型半胱氨酸的檢測方法,其特征
    在于:所述抗SAH抗體和SAH的結合能夠抑制抗SAH抗體和SAH-DNA引物
    的結合,并恢復DNA多聚酶的活性,合成新的雙鏈DNA,并釋放出焦磷酸。
    6.根據權利要求1所述的非診斷目的的同型半胱氨酸的檢測方法,其特征
    在于:所述形成的新的雙鏈DNA的含量能夠通過熒光染料標記來測定。
    7.根據權利要求1所述的非診斷目的的同型半胱氨酸的檢測方法,其特征
    在于:所述DNA多聚酶的活性能夠通過新的雙鏈DNA形成時所釋放焦磷酸的
    含量來測定。
    8.根據權利要求1至7中任一權利要求所述的非診斷目的的同型半胱氨酸
    的檢測方法,其特征在于:待檢樣品為血清、血漿、唾液、尿液和上述物質提
    取物中的一種。
    9.根據權利要求1所述檢測方法建立的同型半胱氨酸的檢測試劑盒,其特
    征在于:包括第一試劑、第二試劑和第三試劑,所述第一試劑包括甲基轉移酶、
    抗SAH抗體、dNTP和S-腺苷-L-蛋氨酸;所述第二試劑包括帶有S-腺苷-L-同
    型半胱氨酸SAH的DNA引物和與其互補的DNA模板;所述第三試劑包括DNA
    多聚酶。
    10.根據權利要求9所述的同型半胱氨酸的檢測試劑盒,其特征在于:所述
    第一試劑、第二試劑和第三試劑均為均相試劑。
    展開

專利技術附圖

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