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塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列及其擴增引物

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-29
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201810032082.6 
  • 技術(專利)名稱 塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列及其擴增引物 
  • 項目單位 金宇保靈生物藥品有限公司
  • 發明人 陳君彥,王云凌,王艷杰,張宸,劉建奇,武瑾賢,杜宇榮,謝雪岑,王秀明,魏學峰,劉國英,關平原,陳九連,范秀麗,張燕紅,張貴剛 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 許韋淑
  • 發布時間 2022-01-29  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列及其擴增引物。本發明先用一步RT?PCR方法擴增出SVV/CH/ZZ/2016株的7個核苷酸序列片段(S1、S2、S3、S4、S5、S6和S7),然后對7個核苷酸序列片段進行克隆測序,再將7個核苷酸序列片段的DNA序列依次進行拼接、編輯及校正,最終得到塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列。本發明獲得的塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016全基因組序列有利于塞尼卡谷病毒致病機制、分子流行病學、反向遺傳學等的進一步研究,從而對塞尼卡谷病毒的診斷試劑開發、疫苗研制等奠定重要的數據支持和理論基礎。
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  • 02

    說明書

    1.塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列,其核苷酸序列如序列表中SEQ IDNo:1所示。2.根據權利要求1所述的塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列,其特征在于:塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的開放閱讀框的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No:1自5’端第671bp-7213bp所示。3.一種獲得權利要求1所述塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016全基因組序列的方法,包括以下步驟:1)提取塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016 CGMCC 14886的總RNA;2)以RNA為模板,在上述引物組合的引導下,用一步RT-PCR方法擴增塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016全基因組的7個核苷酸序列片段:S1,長度為1195bp、S2,長度為1581bp、S3,長度為1386bp、S4,長度為1235bp、S5,長度為1698bp、S6,長度為1075bp和S7,長度為876bp;3)將7個目的核苷酸序列片段回收、連接、轉化,挑取陽性單克隆菌測序;4)用生物信息學DNAStar軟件依次將步驟3)中得到的7個核苷酸序列片段的DNA序列的重疊部分進行拼接、編輯及校正,得到塞尼卡谷病毒SVV/CH/ZZ/2016的全基因組序列。4.根據權利要求3所述的方法,其特征在于:所述步驟2)中的一步RT-PCR的50μL反應體系包括:總RNA2μL、2×One Step RT-PCR BufferⅢ25μL、5U/μL的TaKaRa Ex Taq HS1μL、PrimeScript RT enzyme MixⅡ1μL、20μM的上游引物1μL、20μM的下游引物1μL、無RNA酶水19μL。5.根據權利要求3或4所述的方法,其特征在于:所述步驟2)中的一步RT-PCR反應程序為:先42℃反轉錄30min,再95℃預變性3min;然后94℃變性10s、50℃-60℃退火30s-60s、72℃延伸30s-120s,共35個循環;最后72℃延伸10min。
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