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miR-885-5p在制備判斷原發性肝癌臨床分期的診斷試劑中的用途

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-12
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210222211.0 
  • 技術(專利)名稱 miR-885-5p在制備判斷原發性肝癌臨床分期的診斷試劑中的用途 
  • 項目單位 中國人民解放軍總醫院
  • 發明人 田亞平,張竹紅 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 陳莛皓
  • 發布時間 2021-12-12  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種醫學診斷用方法,具體的說是一種通過檢測原發性肝細胞癌組織中miR-885-5p的表達量來判斷肝癌臨床分期的方法,該方法是通過原位雜交技術實現的,屬于臨床免疫診斷方法,特別是運用原位雜交方法檢測miR-885-5p從而判斷肝癌惡性程度的方法。具體的技術方案是通過探針與小RNA的結合以及抗原抗體反應和呈色反應,顯示細胞或組織中的miR-885-5p含量,在顯微鏡下可清晰看見細胞內發生的抗原抗體反應的產物,從而能夠在細胞或組織原位確定miR-885-5p的含量。并且以此進一步判斷肝癌臨床分期的免疫檢測方法。本發明所載明的方法對肝癌的臨床診斷具有實際意義。
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  • 02

    說明書

    1.一種檢測miR-885-5p的雜交探針在制備用于判斷原發性肝癌臨床分期的診斷試劑中的用途,其特征在于雜交探針的序列為:5’AGAGGCAGGGTAGTGTAATGGA3’,所述的miR-885-5p雜交探針是經過標記的探針。 2.根據權利要求1所述的用途,其特征在于所述的miR-885-5p雜交探針是經過地高辛標記的探針。 3.根據權利要求1所述的用途,其特征在于使用所述診斷試劑判斷原發性肝癌臨床分期的步驟如下: (1)脫蠟和水化,具體步驟如下: ①組織切片置于二甲苯Ⅰ中浸泡5分鐘, ②組織切片置于二甲苯Ⅱ浸泡5分鐘, ③組織切片置于二甲苯Ⅲ浸泡5分鐘, ④組織切片置于99.9%乙醇Ⅰ中上下浸泡10下, ⑤組織切片置于99.9%乙醇Ⅱ中上下浸泡10下, ⑥組織切片置于99.9%乙醇Ⅲ浸泡5分鐘, ⑦組織切片置于96%乙醇Ⅰ中上下浸泡10下, ⑧組織切片置于96%乙醇Ⅱ中浸泡5分鐘, ⑨組織切片置于70%乙醇Ⅰ中上下浸泡10下, ⑩組織切片置于70%乙醇Ⅱ中浸泡5分鐘; (2)組織切片置于磷酸鹽緩沖液中浸泡2-5分鐘; (3)孵育蛋白酶K,將100μl濃度為15μg/ml的蛋白酶K滴加于組織切片表面,37℃孵育10分鐘; (4)用磷酸鹽緩沖液洗處理過的組織切片2次,每次五分鐘; (5)組織切片脫水,具體步驟如下: ①組織切片置于70%乙醇Ⅰ中上下浸泡10下, ②組織切片置于70%乙醇Ⅱ中浸泡5分鐘, ③組織切片置于96%乙醇Ⅰ中上下浸泡10下, ④組織切片置于96%乙醇Ⅱ中浸泡1分鐘, ⑤組織切片置于99.9%乙醇Ⅰ上下浸泡10下, ⑥組織切片置于99.9%乙醇Ⅱ浸泡1分鐘; (6)探針與miR-885-5p的雜交,將雜交液50nM100μl滴加在組織切片中,將其放入濕盒中,55℃孵育1小時; (7)SSC緩沖液洗組織切片,具體步驟如下: ①組織切片置于55℃的5×SSC緩沖液浸泡5分鐘, ②組織切片置于55℃的5×SSC緩沖液浸泡5分鐘, ③組織切片置于55℃的1×SSC緩沖液浸泡5分鐘, ④組織切片置于55℃的1×SSC緩沖液浸泡5分鐘, ⑤組織切片置于55℃的1×SSC緩沖液浸泡5分鐘, ⑥組織切片置于55℃的0.2×SSC緩沖液浸泡5分鐘; (8)封閉液封閉,室溫靜置15分鐘; (9)滴加連有堿性磷酸酶的抗地高辛抗體1:800 100μl,室溫靜置1小時; (10)PBST緩沖液洗3次,每次5分鐘; (11)KTBT緩沖液洗2次,每次5分鐘; (12)去離子水洗2次,每次1分鐘; (13)核固紅100ml滴加于組織切片上染核,室溫靜置10分鐘; (14)流水洗組織切片10分鐘; (15)脫水、透明,具體步驟如下: ①組織切片置于70%乙醇中浸泡30秒, ②70%乙醇中浸泡1分鐘, ③組織切片置于96%乙醇中上下浸泡10下, ④組織切片置于96%乙醇中浸泡1分鐘, ⑤組織切片置于99.9%乙醇Ⅱ上下浸泡10下, ⑥組織切片置于99.9%乙醇Ⅲ浸泡1分鐘, ⑦二甲苯Ⅱ中浸泡5分鐘, ⑧二甲苯Ⅰ浸泡5分鐘; (16)樹脂封片、鏡檢。
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